前言胃癌是严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一,发病率位居所有恶性肿瘤的第4位,死亡率位列所有肿瘤的第2位。长期以来包括手术切除及其他综合性治疗的应用,并没有带来满意的生存率,胃癌迄今仍是全球人口主要癌症死亡原因,在中国与其它东亚国家尤其重要。随着肿瘤分子生物学研究的深入为肿瘤的药物治疗提供了一种新的模式:分子靶向治疗(molecular targeting therapy)。靶向治疗制剂的高效低毒特性越来越引起临床医师的重视,目前分子靶向药物的发展,大多集中在与细胞生长、分化以及各种细胞凋亡调控机制相关的信号传导路径,这些信号传导路径多是通过一些酪氨酸激酶(tyrosine kinases)的活化来调控。成纤维细胞生长因子2型受体(fibroblast growth factor receptor-2,FGFR2)和血管内皮细胞生长因子2型受体(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)均是受体型酪氨酸激酶,研究表明FGFR2和VEGFR2与肿瘤血管的形成密切相关,与肿瘤的分期、转移、预后及疗效密切相关,同时它们在分子靶向治疗中发挥重要作用;c-Cb1最近被证明是泛素-蛋白酶体通路中的一个新的RING Finger型泛素连接酶(ubiquitin ligase,E3)。c-Cb1可以介导受体酪氨酸激酶的降解,因此参与细胞内信号转导的负调控机制。国内外尚未见对于胃癌中FGFR2、VEGFR2和c-Cb1的表达及其相关性的研究,本研究构建胃癌组织芯片,应用免疫组化的方法,检测三种蛋白的表达情况,分析其与临床病理特征的关系,以及三者相互之间的联系,旨在探讨FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌组织中的表达及其临床意义。材料与方法1、组织标本共有124例来自于中国医科大学附属第一医院及辽宁省肿瘤医院2005年10月～2006年8月手术切除的胃癌(术前未行化放疗)组织标本。其中男性92例,女性32例;年龄24～85岁,中位年龄60岁;病理均为腺癌,高分化11例,中分化29例,低分化84例;侵犯肌层76例,侵犯浆膜层48例;有淋巴结转移100例,未发生转移24例。胃癌组织分期采用国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的P-TNM分期标准:T1肿瘤局限于粘膜层或粘膜下层,T2肿瘤侵及肌层,T3肿瘤侵及浆膜下,T4肿瘤穿透浆膜或侵犯周围器官;其中Ⅰ期17例,Ⅱ期46例,Ⅲ期37例,Ⅳ期24例。124例胃癌组织取其中24例距胃癌组织5厘米以远的正常胃组织作为对照。2、试剂兔抗人FGFR2多克隆抗体购自ABCAM公司;兔抗人VEGFR2多克隆抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司;鼠抗人c-Cb1单克隆抗体购自BD公司;S-P检测试剂盒、DAB显色液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。3、方法将124例胃癌组织与24例正常胃组织标本制作成组织芯片,采用免疫组化S-P法,按照S-P检测试剂盒说明书所示步骤进行,FGFR2、VEGFR2切片经柠檬酸缓冲液(PH=6.0)微波抗原修复,c-Cb1无需抗原修复,组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。4、免疫组化结果判定FGFR2、VEGFR2和c-Cb1均以胞膜和/或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色,于显微镜400倍视野下随机选取5个有代表性的不同区域,每个视野的得分由阳性细胞的比例和显色强度两方面决定,依照阳性细胞比例:＜5%、5%—25%、25%-50%、50%-75%、＞75%分别得0分、1分、2分、3分、4分;依照显色强度:未着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别得0分、1分、2分、3分;将两项得分相乘得到该视野的最终得分,选取的5个视野得分的平均值为最后得分。最后该切片按照得分分为以下四个等级:0—1分为(-),2—4分为(+),5-7分(++),≥8分(+++)。(-)为阴性,(+)为弱阳性表达,(++)～(+++)为强阳性表达。5、统计学分析以SPSS13.0软件进行统计分析。应用四格表x~2检验及Fisher确切概率法;采用Mann-Whitney U非参数检验和Spearman等级相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。实验结果1、FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌组织中的表达FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌组织中的阳性表达率分别为77.4%、85.5%、71.0%,均为高水平表达。2、胃癌组织中FGFR2、VEGFR2和c-Cb1的表达情况与临床病理因素的关系FGFR2蛋白表达与浸润深度及病理分期有关(P＜0.05),且随浸润程度加深及病理分期变晚而表达增强(相关系数及P值分别为r=0.264,P=0.003和r=0.260,P=0.004)而与性别、年龄、分化程度及淋巴结转移无关(P＞0.05);VEGFR2蛋白表达与浸润深度、淋巴结转移及病理分期有关(P＜0.05),且随浸润程度加深、淋巴结转移及病理分期变晚而表达增强(相关系数及P值分别为r=0.311,P=0.000和r=0.451,P=0.000和r=0.554,P=0.000),而与性别、年龄、分化程度无关(P＞0.05);c-Cb1蛋白表达与浸润深度及病理分期有关(P＜0.05),且随浸润程度加深及病理分期变晚而表达增强(相关系数及P值分别为r=0.219,P=0.015和r=0.266,P=0.003)而与性别、年龄、分化程度及淋巴结转移无关(P＞0.05)。3、胃癌组织中FGFR2、VEGFR2和c-Cb1表达之间的相关性FGFR2与c-Cb1的表达强度呈正相关,相关系数及P值分别为r=0.465,P=0.000;VEGFR2与c-Cb1的表达强度呈正相关,相关系数及P值分别为r=0.190,P=0.035,4、胃癌组织中FGFR2、VEGFR2和c-Cb1蛋白均强阳性表达与临床病理特征之间的关系124例胃癌组织病理标本中共有26例三种蛋白同时呈强阳性表达,在分化程度差,肿瘤组织浸润程度深,淋巴结转移数目多及分期晚的病例中更多见。结论1、FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌中高表达;FGFR2及c-Cb1蛋白的表达强度与胃癌的浸润深度及病理分期均呈正相关;VEGFR2的表达强度与胃癌的浸润深度,淋巴结转移及病理分期呈正相关;三者同时强阳性表达更多见于分化差,浸润程度深,淋巴结转移数目多及分期晚的病例中。2、FGFR2与c-Cb1的表达强度呈正相关,VEGFR2与c-Cb1的表达强度呈正相关。