【摘 要】
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杆状病毒(baculovirus)是一类特异性感染无脊椎动物(主要指昆虫)的双链DNA病毒,目前被广泛应用于生物杀虫剂和基因表达系统。杆状病毒的典型特征是在感染生活史中产生两种遗传物质完全一致却具有不同病毒形态和囊膜成分的病毒粒子,即出芽型病毒粒子(Budded virus,BV)和包涵体衍生型病毒粒子(Occlusion-derived virus,ODV)。杆状病毒感染早期主要产生单个游离病毒
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杆状病毒(baculovirus)是一类特异性感染无脊椎动物(主要指昆虫)的双链DNA病毒,目前被广泛应用于生物杀虫剂和基因表达系统。杆状病毒的典型特征是在感染生活史中产生两种遗传物质完全一致却具有不同病毒形态和囊膜成分的病毒粒子,即出芽型病毒粒子(Budded virus,BV)和包涵体衍生型病毒粒子(Occlusion-derived virus,ODV)。杆状病毒感染早期主要产生单个游离病毒BV,而在晚期和极晚期病毒核衣壳滞留在细胞核内并从内核膜获得囊膜,然后被病毒表达的多角体蛋白包裹入多角体晶体而成为ODV。这两种病毒粒子的作用存在差异,前者主要是负责病毒在昆虫体内各个组织和细胞之间的传播与感染;而后者主要是特异性感染昆虫的中肠上皮细胞(包括柱状上皮细胞和再生细胞),引起原发感染。
本研究以家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)为研究对象。针对目前构建的重组病毒因无法产生多角体,导致经口感染受阻,因此本研究利用“Bac-to-Bac杆状病毒表达系统”构建了一种绿色荧光重组病毒,该重组病毒同时表达多角体蛋白和绿色荧光蛋白,可用于模仿野生型病毒进行经口感染研究。本文利用该重组病毒和野生型家蚕杆状病毒研究了病毒感染家蚕中肠等主要器官后的病毒基因转录以及多角体形成等特性,重点分析了病毒感染中肠的特异性。主要的结论如下:
1、利用“Bac-to-Bac杆状病毒表达系统”成功构建了同时表达多角体蛋白和绿色荧光蛋白的重组病毒,该病毒可实现经口感染,是一种可以模仿野生型病毒应用于杆状病毒研究的工具病毒,为深入研究杆状病毒感染的分子机制创造了条件。
2、利用上述工具病毒,研究了家蚕BmNPV经口感染后中肠等主要组织之间的感染差异,发现杆状病毒在脂肪体、血液、气管等组织均产生大量多角体,而在中肠内虽然病毒的polh等基因转录水平较高,但最后形成的多角体数目极少,暗示病毒在中肠组织的感染具有特异性,以产生BV为主,以便迅速实现病毒向周边组织的扩散和传播,最终实现全身感染。
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