【摘 要】
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脑卒中是目前临床致残率与致死率极高的心脑血管疾病之一。临床调查显示,由血管阻塞引起的急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)占脑卒中发病总数的70-80%。然而,目前针对缺血性脑卒中的诊疗策略总体上存在诊断准确性差、干预时间滞后等缺点,因此,如何应对脑卒中的突发性,并在狭窄的诊疗时间窗(4.5 h)内进行快速精确诊断与及时干预仍是临床治疗中急需解决的问题。本论文受血小
【基金项目】
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国家自然科学基金项目面上项目(81971750);
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脑卒中是目前临床致残率与致死率极高的心脑血管疾病之一。临床调查显示,由血管阻塞引起的急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)占脑卒中发病总数的70-80%。然而,目前针对缺血性脑卒中的诊疗策略总体上存在诊断准确性差、干预时间滞后等缺点,因此,如何应对脑卒中的突发性,并在狭窄的诊疗时间窗(4.5 h)内进行快速精确诊断与及时干预仍是临床治疗中急需解决的问题。本论文受血小板在缺血性脑卒中发生、发展过程中的作用机制启发,利用血小板膜的天然靶向性,开发了装载L-精氨酸和γ-Fe2O3磁性纳米粒子的仿生纳米递送载体,并进行了制备方法的优化;进而,制备了具备可分辨的损伤程度差异的小鼠脑卒中光栓模型,对所制备的血小板膜仿生纳米载体应用于制得脑卒中模型的靶向性、磁共振影像增强效果及血管再通效果进行了研究,具体主要研究工作如下:1.采用过膜挤出法制备了装载L-精氨酸和γ-Fe2O3磁性纳米粒子的血小板仿生纳米载体(L-arginine encapsulated platelet membrane magnetic nanocarrier,PAMNs),制得PAMNs粒径为195.17±46.62 nm。此外,探究了制备粒度均一(500-1000 nm)的纯净血小板膜的最适条件,并进一步全面表征了PAMNs与其各组件成分(即γ-Fe2O3磁性纳米粒子、血小板膜微囊、血小板膜@γ-Fe2O3磁性纳米粒子与血小板膜@L-精氨酸)的基本参数、形貌、包载与挤压对血小板膜蛋白的影响及制备缓冲液体系对PAMNs的影响。结果表明,高频超声水浴相对冻融裂解能获得粒度更为均一的血小板膜,挤压过膜几乎不对血小板膜蛋白的种类与含量造成影响。2.通过光栓法在小鼠脑部构建了大血管损伤和微血管损伤两种AIS模型,并借助MRI-DWI、激光散斑血流成像及H&E病理组织染色证实,制得的AIS模型分别具有小范围、轻微栓塞与大范围、严重梗死两种不同的病灶表现,可分别用以表征轻症与重症AIS的病灶病理水平。3.在AIS诊断方面,将PAMNs应用于上述两种模型,证明了PAMNs可在MRI-T2WI诊断中表现出对AIS病灶的特异性增强效果。T2WI与T2*WI结果显示,PAMNs给药后,随时间在轻症AIS模型病灶内部的积累效率明显高于重症模型;重症AIS模型中,PAMNs主要富集在病灶边缘之外。由此,可根据PAMNs在病灶部位的分布范围与其特异性靶向位点辨别AIS病灶的阻塞位点与栓塞程度等特征,并可用于实时判定病灶的缺血半影与梗死核心等,可为MRI诊断AIS提供有效参考。4.在AIS血管再通预保护方面,首先,通过普鲁士蓝病理组织染色证明了PAMNs向AIS病灶的有效递送;进而,通过MRI-DWI对制得两种模型脑部进行成像,表征了病灶的发展水平,证实在PAMNs给药后的6 h内,不同水平的AIS的病灶面积发展均能得到有效抑制。最后,激光散斑血流成像结果表明,PAMNs给药后,轻症AIS模型病灶区域血流水平发生显著恢复,平均上升至给药前的2.5倍左右(相比于对照组病灶区域血流量随时间发展持续下降);重症AIS则主要受到严重血管损伤的影响,其病灶范围内,PAMNs给药组的血流水平相比于对照组基本未发生明显改变。因此,PAMNs可在AIS病灶发展早期发挥出可观的抑制作用,延长了AIS的诊疗时间窗,为临床诊疗策略的制定与实施争取了有利条件。综上所述,本文制备了装载磁性纳米颗粒和一氧化氮前体L-精氨酸的血小板膜仿生纳米载体,且此纳米载体在缺血性脑卒中的磁共振诊断中表现出显著的缺血病灶靶向性与造影增强性能,这种造影增强可同时用于梗死核心的实时界定与缺血病灶的栓塞水平评估,有助于临床病例中后续诊疗策略的制定。此外,借助于此仿生纳米材料向脑卒中病灶的靶向性,其内含的L-精氨酸在到达病灶部位后被逐渐释放,并在内皮型一氧化氮合成酶的催化下原位产生一氧化氮,扩张血管并抑制病灶的进一步发展。由此,结合于现有的临床诊疗技术,这一搭载L-精氨酸的靶向性磁性血小板仿生纳米载体可安全、有效地实现急性缺血性脑卒中的靶向磁共振诊断,并在这一过程中显示出优良的脑血管再通预保护效果。
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