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背景:丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是能导致严重肝脏疾病的公共卫生问题之一。HCV感染后极易发展为慢性感染,近80-85%可发展为慢性丙型肝炎(Chronic Hepatitis C,CHC)。近年很多研究发现HCV感染后慢性化主要是由于T细胞耗竭,其主要特征之一是抑制性受体表达上调。淋巴细胞活化因子-3(Lymphocytes Activation Gene-3,LAG-3)是新近发现的T细胞免疫抑制性受体,负调控T细胞增殖、分泌和杀伤等功能,导致T细胞功能耗竭,但其机制尚未阐明。目的:本研究旨在探讨HCV感染形成的炎性微环境对LAG-3的影响,以及LAG-3在CD8+T免疫调控的作用以及初步机制。方法:1.收集郴州市具有静脉吸毒史的自愿者血液样本,根据抗-HCV抗体(HCV Ig G)、HCV RNA结果将纳入病例分为:慢性丙型肝炎组和健康对照组;2.ELISA检测血浆中白介素-12p70(Interleukin-12p70,IL-12p70)、白介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(Transforming Growth factor-β,TGF-β)的浓度;3.流式细胞分析仪检测LAG-3、T-bet(T-box expressed in T cell,T-bet)和HLA-DR(Human Leukocyte Antigen-DR,HLA-DR)等表达水平以及胞内IL-10、IFN-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的分泌水平;4.体外实验:取健康对照组外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs)1×106/孔接种于96孔平底板,用不同的细胞因子(IL-10、IL-12和TGF-β)刺激72h后收集细胞,流式细胞分析仪检测不同刺激因素对CD8+T细胞表达LAG-3的影响。结果:1.与健康对照组相比,慢性丙型肝炎患者CD8+T细胞LAG-3表达水平增高(p=0.012),且与病毒滴度呈正相关(p=0.036,r=0.484);2.与健康对照组相比,慢性丙型肝炎患者CD8+T细胞胞内IFN-γ水平显著下降(p=0.04),IL-10水平没有显著性差异(p=0.33);3.慢性丙型肝炎组,CD8+T细胞中LAG-3阳性群IFN-γ的表达水平明显低于LAG-3阴性群(p=0.02);健康对照组无明显差异;4.与健康对照组相比,慢性丙型肝炎患者血浆IL-10(p=0.001)和IL-12(p=0.019)水平显著上升,TGF-β水平显著下降(p=0.01);体外实验证实:r IL-12上调CD8+T细胞表达LAG-3是依赖T细胞抗原受体(T Cell Receptor,TCR)活化的方式(p=0.002),r TGF-β下调CD8+T细胞表达LAG-3也是依赖TCR活化的方式(p=0.002);5.慢性丙型肝炎组,CD8+T细胞中LAG-3阳性群HLA-DR表达水平高于LAG-3阴性群(p<0.001),CD8+T细胞中LAG-3阳性群T-bet表达水平低于LAG-3阴性群(p=0.037);在活化的CD8+T细胞中LAG-3阳性群T-bet表达水平低于LAG-3阴性群(p=0.005);6.慢性丙型肝炎组,活化的CD8+T细胞LAG-3表达水平与T-bet表达水平呈负相关(p=0.005,r=-0.943)。结论:1.慢性丙型肝炎患者血浆中IL-10和IL-12水平升高,TGF-β水平降低。2.慢性丙型肝炎患者CD8+T细胞LAG-3表达上调。3.在慢性丙型肝炎患者,CD8+T细胞LAG-3表达水平与病毒载量呈正相关。4.由于HCV抗原持续刺激,免疫细胞快速启动免疫反应分泌多种细胞因子,这种炎性微环境促使CD8+T细胞上调免疫抑制性受体LAG-3表达,LAG-3通过影响T-bet表达,从而影响CD8+T细胞IFN-γ表达,这可能是T细胞耗竭的原因之一。5.阐释了LAG-3在CD8+T细胞免疫调控的作用以及初步机制。为HCV感染后慢性化机制和治疗提供了新的视角。