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我国桑树种质资源居世界第一位,拥有丰富的桑叶资源。桑叶作为一种优良的中药材,现已被国家卫生部列入“既是食品又是药品”的资源名单。桑叶具有清热解毒作用,作为凉茶原料,在民间应用历史悠久。本文从桑叶抑菌作用的角度,从岭南地区代表性桑品种中筛选出抑菌优势品种,研究其抑菌作用的物质基础和作用机理具有重要意义。主要实验结果如下: (1)抑菌优势桑品种的筛选。分别用沸水、70%乙醇、乙醇、乙酸乙酯和石油醚等溶剂对桑叶进行平行提取,采用琼脂打孔法比较不同溶剂提取物对5种常见致病菌的抑制作用,以70%乙醇提取物的抑菌活性最佳。在20个品种中筛选出对金黄色葡萄球菌的抑制作用最好的品种是94-7和44-7,对普通变形杆菌效果最好的品种是塘10。桑叶提取物总黄酮含量与对金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌的抑制活性的相关系数R分别为0.536(P<0.05)和0.640(P<0.01),表明桑叶中的黄酮是起抑菌作用的重要物质基础之一,但同时还存在其他的抑菌活性成分。 (2)桑叶提取物抑菌谱及抑菌稳定性的研究。采用微量稀释法测定5个品种桑叶提取物对供试菌株的最小抑菌浓度(MIC)。发现品种44-7对金黄色葡萄球菌的MIC达到1.25mg/mL;44-7和94-7两个品种对枯草芽孢杆菌的MIC均达到0.625mg/mL。探讨热处理、紫外线照射、介质pH值、糖和盐对桑叶70%乙醇提取物抑菌活性的影响。发现热处理及紫外线照射对桑叶70%乙醇提取物的抑菌活性没有明显影响;随着介质pH值的增大,桑叶提取物抑菌活性呈下降趋势;随着糖和盐浓度的增大,桑叶提取物抑菌活性有所增强。 (3)桑叶中抑菌活性物质的成分分析。采用琼脂打孔法和微量稀释法研究桑叶提取物4个萃取部位的抑菌活性。结果表明石油醚部的抑菌活性最高,其次为乙酸乙酯部,正丁醇部和水部活性较弱或没有活性。利用GC-MS法测定桑叶石油醚部的化学成分,发现植物醇的含量最高,为24.87%,其次为环二十八烷(18.0%)、棕榈酸(10.20%)、α-亚麻酸(9.06%)、亚麻酸乙酯(7.92%)、硬脂酸(7.14%),此外还含有少量α-生育酚、β-谷甾醇等活性成分,其中抑菌活性成分主要有棕榈酸,α-亚麻酸和硬脂酸。乙酸乙酯部经薄层层析,LC-MS和HPLC分析,确定乙酸乙酯部含有绿原酸、芦丁、金丝桃苷、苯甲酸、紫云英苷和异槲皮素等多酚黄酮类物质,其中抑菌活性成分主要有苯甲酸,绿原酸,芦丁和金丝桃苷,苯甲酸含量高达52.63μg/mg。 (4)桑叶提取物抑菌机理的初步研究。从细菌形态,细菌细胞壁,细菌细胞膜等方面对桑叶石油醚萃取物的抑菌机理进行初步研究。结果表明桑叶石油醚萃取物能够抑制金黄色葡萄球菌对数生长期的菌体分裂,且浓度越高抑制作用越明显。扫描电镜观察发现桑叶石油醚萃取物作用后的金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌,菌体形态与对照组相比都有明显的改变。桑叶石油醚萃取物对金黄色葡萄球菌的细胞壁有一定的破坏作用,能改变菌体细胞膜的通透性,但这种改变可能是细胞膜的微小损伤。综上,桑叶提取物的抑菌作用机制可能是通过破坏菌体细胞壁和细胞膜的通透性来实现的。