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目的:本课题旨在通过观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)干预大鼠骨髓源性内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)来源Exosomes对自身体外凋亡的影响,进一步探讨其可能的作用机制。
方法:1、大鼠骨髓源性EPCs采用密度梯度离心法分离、培养,当细胞培养七天以后,对其抽样进行流式细胞术及激光共聚焦双染色鉴定,并收集备用。
2、将收集到的大鼠骨髓源性EPCs重悬,予以APS(浓度:0.4mg/ml)体外干预24小时(设立对照组),收集细胞上清液备用。
3、将收集到的大鼠骨髓源性EPCs上清液运用离心超滤和蔗糖密度梯度离心法将提取细胞来源Exosomes,收集备用。
4、将收集到的大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes利用透射电镜下观察其形态;Western Blot检测Exosomes GAPOH、CD9、CD31、CD63、CD8、hsp70、Alix、TSG101的表达。
5、予APS(浓度:0.4mg/ml)体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源不同浓度Exosomes(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/m1)干预培养自身细胞(设立对照组)。流式细胞仪检测细胞的凋亡。
结果:1、大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效促进自身细胞抗凋亡能力,且呈浓度依赖性变化f(P<0.01)。
2、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效促进自身细胞抗凋亡能力,且呈浓度依赖性变化(P<0.01)。
3、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes对自身细胞的凋亡、黏附能力较单纯大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes促进自身细胞抗凋亡能力更显著,且呈浓度依赖性变化(P<0.01)。
结论:1、大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效延缓细胞的凋亡。
2、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效延缓细胞的凋亡。
3、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes对自身细胞延缓细胞的凋亡的能力更显著。
方法:1、大鼠骨髓源性EPCs采用密度梯度离心法分离、培养,当细胞培养七天以后,对其抽样进行流式细胞术及激光共聚焦双染色鉴定,并收集备用。
2、将收集到的大鼠骨髓源性EPCs重悬,予以APS(浓度:0.4mg/ml)体外干预24小时(设立对照组),收集细胞上清液备用。
3、将收集到的大鼠骨髓源性EPCs上清液运用离心超滤和蔗糖密度梯度离心法将提取细胞来源Exosomes,收集备用。
4、将收集到的大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes利用透射电镜下观察其形态;Western Blot检测Exosomes GAPOH、CD9、CD31、CD63、CD8、hsp70、Alix、TSG101的表达。
5、予APS(浓度:0.4mg/ml)体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源不同浓度Exosomes(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/m1)干预培养自身细胞(设立对照组)。流式细胞仪检测细胞的凋亡。
结果:1、大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效促进自身细胞抗凋亡能力,且呈浓度依赖性变化f(P<0.01)。
2、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效促进自身细胞抗凋亡能力,且呈浓度依赖性变化(P<0.01)。
3、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes对自身细胞的凋亡、黏附能力较单纯大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes促进自身细胞抗凋亡能力更显著,且呈浓度依赖性变化(P<0.01)。
结论:1、大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效延缓细胞的凋亡。
2、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes能有效延缓细胞的凋亡。
3、APS体外干预大鼠骨髓源性EPCs来源Exosomes对自身细胞延缓细胞的凋亡的能力更显著。