黄热病毒(Yellow Fever virus,YFV)起源于非洲,是首个被分离出来的人类病毒,蚊子是其主要的传播载体。该病毒能够引发典型的病毒性出血热,严重时还会导致患者死亡。2017年初,安哥拉、刚果和乌干达等地区相继报道了大范围的黄热病疫情,这也是30年来该病毒在这些地区的首次爆发,随后在中国等多个地区也确诊了十几例感染病例,YFV的“再度出现”吸引了全球人类的关注。伴随着城市化、交通运输的快速发展,YFV蔓延的风险也会增加,人们的患病几率也大大增加。但是目前并没有特异性药物来治疗YFV的感染,抗病毒药物的研发任务紧迫。与其他黄病毒相同,YFV蛋白酶是一种典型的丝氨酸蛋白酶,其位于非结构蛋白3的N端三分之一,需要NS2B来激活。其可对病毒基因组编码的多聚蛋白进行加工处理,使它们水解成能够独立行使功能的蛋白,从而参与病毒组装和基因组的复制。因此NS2B-NS3蛋白酶在病毒的增殖过程中发挥着不可或缺的作用,是一种非常具有潜力的药物靶点。在本论文中,我们以YFV NS2B-NS3蛋白酶作为实验对象,使用原核表达系统和多种纯化方式获得了高纯度的蛋白,并使用荧光底物对其酶活进行了测定。同时建立了灵敏的药物筛选体系,不仅用丝氨酸蛋白酶抑制剂Aprotinin测定了抑制效果,还对化合物库中3000多种小分子进行了筛选,发现了三种有抑制效果的小分子。最后,对其中一种效果较好的抑制剂十六烷基氯化吡啶进行了抑制类型和抑制常数的测定。以上研究不仅为抗YFV药物的研发筛选到了新的先导化合物,同时也为进一步研究蛋白酶与化合物之间的构效关系提供了基础。