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目的:通过对100例人胶质瘤标本的处理和检测,研究核转运蛋白β1(Karyopherinβ1,KPNB1)与胶质瘤临床特征的相互关系,并进一步在细胞水平研究KPNB1对Wnt/β-Catenin通路的调节作用及其对胶质瘤细胞增殖能力的影响。方法:应用免疫印迹和免疫组织化学检测技术,在100例人胶质瘤标本中检测KPNB1与增殖细胞相关核抗原(Ki-67)的表达水平,结合患者的各项临床资料,明确KPNB1与胶质瘤恶性程度、增殖能力、临床预后等特征的相关性。应用U251和U87MG两种胶质瘤细胞系构建血清饥饿-释放细胞模型,应用免疫印迹技术检测各时间点KPNB1、β-Catenin及PCNA(proliferating cell nuclear antigen)、p27等细胞增殖能力标记物的表达水平,在细胞水平验证KPNB1与细胞增殖的相关性。然后,应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),构建KPNB1基因稳定沉默的细胞模型,分别应用流式细胞检测、细胞技术试剂盒(cell counting kit,CCK-8)、克隆形成计数等实验方案,验证KPNB1沉默对细胞增殖能力的抑制作用。接着,应用细胞核浆分离及免疫印迹,验证KPNB1沉默对β-Catenin核内转运的影响。最后,应用免疫共沉淀技术,验证KPNB1与β-Catenin是否存在直接的相互作用。结果:我们发现,在本课题所检测的100例人胶质瘤标本中,KPNB1的表达水平与人胶质瘤的WHO分级、Ki-67表达水平成正相关,与患者预后成反相关。在U251与U87MG细胞血清饥饿-释放实验中,我们都发现KPNB1、β-Catenin的表达水平与PCNA、p27等细胞增殖能力标记物成正相关,进一步证实KPNB1与胶质瘤细胞增殖能力相关,而且KPNB1极有可能通过调节WNT/β-Catenin通路影响胶质瘤细胞增殖。之后,在KPNB1稳定沉默的细胞模型中,多种实验方法都表明了KPNB1沉默可抑制胶质瘤细胞增殖。同时,β-Catenin在胞核内的表达水平明显低于胞浆,而在未经处理的细胞内,情况则与此相反。最后,免疫共沉淀实验表明KPNB1与β-Catenin确实存在直接相互作用。结论:1.KPNB1的表达水平与胶质瘤恶性程度成正相关,且与患者预后成相关关系。2.KPNB1可调控β-Catenin的核内转运,从而影响Wnt/β-Catenin通路,调节胶质瘤细胞增殖的能力。3.KPNB1与β-Catenin之间存在直接相互作用。