【摘 要】
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猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)为圆环病毒科,圆环病毒属成员,分为PCV1和PCV2两个血清型。PCV1不引起猪发病;但是PCV2不仅是原发性断奶仔猪多系统衰竭综合征(PWMS)的主
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猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)为圆环病毒科,圆环病毒属成员,分为PCV1和PCV2两个血清型。PCV1不引起猪发病;但是PCV2不仅是原发性断奶仔猪多系统衰竭综合征(PWMS)的主要病原,还与许多疾病密切相关。PCV2能在猪单核巨噬细胞中增殖,造成免疫细胞数量减少和对病原缺乏有效的免疫应答能力。建立对该病原和感染血清抗体检测对有效防治本病具有重要意义。本研究采用PCR方法扩增了去除核定位信号序列的PCV2 ORF2基因片断约576bp,将所得片断与表达载体pPRO-HTb进行连接,连接产物转化到感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,重组菌经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测初步证明PCV2 Cap蛋白获得了表达,产物分子量约为27ku,Western-Blot分析,所表达的蛋白能与PCV2阳性抗血清发生特异性反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性,为以重组蛋白为检测抗原建立PCV2血清抗体检测方法奠定了基础。重组蛋白经纯化和复性免疫BALB/c小鼠,按常规方法取SP2/0骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞融合,制备了杂交瘤细胞,通过有限稀释经3～4次筛选、克隆,获得了3株稳定分泌抗体的抗PCV2-Cap蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,3株单抗分别命名为1C2,3C11和3E11。其细胞培养上清抗体效价分别为1:l600、1:12800和1:l600;3株单抗的Ig亚类均为IgM;Western-blot分析、Dot-ELISA和间接免疫荧光结果显示1C2,3C11和3E11均能与PCV2病毒发生反应,而不与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪细小病毒等引起繁殖障碍、猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒等病毒发生反应,表明这3株单抗具有高度特异性。抗PCV2单克隆抗体的制备,为建立准确、快速的PCV2病原检测提供了基础。
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