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目的:探讨AQP9基因过表达后对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及其可能的机制。方法:将空载体慢病毒(LV-Luciferase)和靶向AQP9基因过表达慢病毒(LV-AQP9)分别转染人肝癌细胞SMMC-7721,并用嘌呤霉素筛选细胞,从而得到空载体稳定细胞株(SMMC-7721/LV-Luciferase)和AQP9过表达稳定细胞株(SMMC-7721/LV-AQP9),最后通过Western blotting检测AQP9在肝癌细胞内表达。实验分组:阴性对照组(NC组)为空载体稳定细胞;AQP9过表达组(AQP9组)为AQP9过表达稳定细胞。并且运用流式细胞术检测过表达AQP9基因对人肝癌细胞周期的影响;实时荧光定量PCR检测SMMC-7721/LV-Luciferase细胞和SMMC-7721/LV-AQP9细胞的周期相关调控因子mRNA水平表达情况;Western blotting技术检测细胞周期相关调控因子,PCNA,pser675β-catenin,β-catenin蛋白水平表达。同时采用免疫荧光染色观察PCNA和β-catenin在两组肝癌细胞中表达情况。两组数据比较采用了独立样本t检验。结果:Western blotting检测结果显示AQP9过表达组较阴性对照组AQP9的蛋白水平有显著升高,差异有统计学意义(P值<0.01)。通过流式细胞技术检测细胞周期,结果显示过表达AQP9基因后影响SMMC-7721细胞周期分布,具体地,SMMC-7721细胞G0-G1期细胞比例由52.24%±0.83%升高到65.68%±0.63%(P值<0.05);S期细胞比例由34.3%±0.65%降低至16.56%±0.85%(P值<0.05);G2-M期由13.46%±0.2%上升到17.4%±1.12%,差异有统计学意义(P值<0.05)。对细胞周期调控因子,PCNA,β-catenin分别进行Western blotting检测,其结果显示:与阴性对照组相比,过表达AQP9组人肝癌细胞细胞周期调控因子Cyclin D1,CDK2,CDK4表达下调,P27表达上调,差异均有统计学意义(P均值<0.05);同时细胞内PCNA,核内β-catenin,pser675-β-catenin表达均降低,差异同样有统计学意义(P值均<0.05)。同样,细胞免疫荧光染色及光密度分析结果显示,与阴性对照组相比,AQP9过表达组PCNA蛋白表达水平下调,差异有统计学意义(P<0.05)。AQP9过表达后影响β-catenin在细胞内的分布。结论:肝癌细胞中过表达AQP9基因后可抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖,根据实验结果分析,其机制可能是AQP9基因下调细胞核内β-catenin的表达水平,进而抑制Cyclin D1蛋白表达水平,使得肝癌细胞阻滞在G1/S期。