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本文主要研究目的是对bc1-2基因转染和CNTF活性蛋白联合对吲哚美辛诱导的家兔视网膜色素上皮细胞（rRPE）凋亡的保护作用进行研究。 本研究分为三部分。 第一部分：家兔RPE细胞的原代培养 首先进行家兔视网膜色素上皮细胞（rRPE）的分离、原代培养、传代及冻存复苏等，然后通过光学显微镜、免疫细胞化学染色法等方法对培养的家兔RPE细胞进行鉴定． 第二部分：bc1-2重组逆转录病毒的构建、转染及鉴定 首先进行目的基因bc1-2和逆转录病毒载体行HindⅢ+Stu Ⅰ双酶切后连接，构建bc1-2重组逆转录病毒，然后通过Invitrogen LipofectamineTM脂质体转染法用bc1-2重组逆转录病毒转染培养的家兔原代RPE细胞，G418（浓度为200μg／ml）筛选出表达bc1-2蛋白的家兔RPE细胞克隆，并使家兔RPE细胞克隆的大量培养扩增，建立稳定表达bc1-2蛋白的家兔RPE细胞株。采用基因测序和PCR方法对bc1-2重组逆转录病毒进行鉴定；采用RT-PCR和Western blotting印迹法对稳定表达bc1-2蛋白的家兔RPE细胞株进行鉴定。 第三部分：家兔RPE细胞的抗凋亡实验研究 首先用不同梯度浓度（0、100、200、400、600、800和1000皿mol／L）的吲哚美辛（indomethacin，IN）作用培养的家兔RPE细胞，筛选出IN使家兔RPE细胞凋亡的最佳浓度（200μmol／L），建立家兔RPE细胞凋亡模型；其次用不同梯度浓度（0、10、20、40ng／ml）的CNTF活性蛋白作用家兔RPE细胞，筛选出有利于家兔RPE细胞生长的最佳浓度（20ng／ml）；然后用浓度为200μmol／L的IN分别作用原代培养的家兔RPE细胞和稳定表达bc1-2蛋白的rRPE细胞株，每组分两个亚组，其中一个亚组加用CNTF活性蛋白（浓度为20ng／ml）作用，另一亚组为对照组。通过光镜下形态学观察、台盼蓝拒染法、MTT法及免疫细胞化学染色法等方法检测家兔细胞凋亡情况，观察并比较bd一2基因转染前后的家兔RPE细胞的抗凋亡作用，以及加用CNTF活性蛋白前后家兔RPE细胞的抗凋亡作用。 经过上述实验我们发现CNTF活性蛋白有一定的抑制家兔RPE细胞凋亡的作用;与稳定表达bcl一2蛋白的家兔RPE细胞共同培养过的家兔RPE细胞抵抗凋亡的能力也较后者有所增强;前两种因素共同参与后，家兔RPE细胞抵抗凋亡的能力显著增强。己有研究证明，并不是所有凋亡都能被bcl一2抑制，例如依赖于睫状神经营养因子（CNTF）的神经细胞凋亡不受bd一2抑制，由此可以说明实验所得结果应该是合理的。 得出结论，bcl一2和CNTF都有不同程度的抑制由叫噪美辛（工N）所诱导的家兔RPE细胞凋亡的作用，而且两者共同作用，其抑制家兔RPE细胞的凋亡作用相当显著。