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本研究的目的是提取、纯化海洋生物Ⅰ号抗鼻咽癌活性成分并对其初步定性分析。
[方法]用乙醇将海洋生物Ⅰ号浸泡,获取乙醇粗提物。用系统溶剂法,将乙醇粗提物与硅藻土混匀,分别用石油醚Ⅱ、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等反复通过快速减压柱洗脱而进一步分离得到提取物A、B、C,用MTT法测定各提取物体外抗鼻咽癌CNE-2Z细胞活性。选用抗肿瘤活性较好且水溶性最好的提取物C,通过大孔吸附树脂HP20柱,取得纯化物并测定各纯化物体外抗鼻咽癌CNE-2Z细胞活性。采用薄层色谱法探索抗鼻咽癌活性成分及其纯化物的柱色谱条件,并结合化学反应、荧光分析法等对其进行初步定性分析。
[结果]海洋生物Ⅰ号提取物A、B、C的提取率(相对海洋生物Ⅰ号总质量)分别为0.17%、0.14%、0.40%。通过MTT法筛选,发现提取物B及C对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长有较明显的抑制作用,而A的作用不明显。提取物C纯化后得到5个组分,MTT分析结果显示,C4、C5对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长有显著的抑制作用,而其它组分则不明显。提取物B薄层色谱的最佳展开系统为氯仿-甲醇,其次为乙酸乙酯-乙醇-氨水;而C4、C5、C的最佳展开系统为乙酸乙酯-乙醇-氨水。各提取物及其纯化物中没有检测到醌类、黄酮类、鞣质及酚类等化合物,但均含有一定的蛋白质、多肽或氨基酸;A、B可能含有机酸或脂肪酸类物质;A、B、C均有甾体、萜类物质,其中薄层色谱结果显示B含量丰富;C、C4、C5可能含有生物碱类物质;C、C3、C4中可能含有糖、多糖或甙类物质。
[结论](1)海洋生物Ⅰ号抗鼻咽癌活性成分主要存在于提取物B、C中。(2)提取物C纯化后,其抗鼻咽癌活性成分主要富集于C4、C5中。(3)氯仿-甲醇展开系统、乙酸乙酯-乙醇-氨水展开系统均可作为提取物A、B柱色谱的参考条件;可选用乙酸乙酯-乙醇-氨水展开系统作为C4、C5、C的柱色谱的参考条件。(4)提取物A、B、C各有不同程度的抗鼻咽癌活性,可能与各含有不同量的甾体、萜类或生物碱类物质有关。(5)提取物B有较强抗鼻咽癌活性可能在于含有中等极性的甾体、萜类等物质;提取物C有较强抗鼻咽癌活性可能在于其含有生物碱类物质。(6)提取物C的纯化物C4、C5,其主要活性成分可能是生物碱类物质。(7)现有方法提取的蛋白质、多肽或氨基酸类物质及糖类物质,其抗肿瘤活性不明显。