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目的:大电导钙激活钾通道(BKca)广泛表达于多种组织,而且是平滑肌钾通道的主要成员。BKCa对于胃肠道平滑肌的膜电位、慢波的时程和幅度,以及收缩强度的调节具有重要意义。BKCa的基因SloⅠ有多种剪接体,该通道的α、β亚基之间存在多种组合,因而在不同的细胞BKCa呈现出功能上的多样性。本文目的在于检测小鼠结肠平滑肌BKCamRNA的全长结构,探明该基因在结肠平滑肌的剪切形式,并对BKCaα亚基在消化道各节段的表达进行半定量比较。
方法:
1.检测消化道不同节段平滑肌BKCa基因和蛋白水平的表达提取小鼠结肠平滑肌组织的总mRNA和总蛋白,用RT-PCR和蛋白免疫印迹((Western blotting)技术,检测BKCaα亚基在小鼠胃、十二指肠、回肠、结肠等平滑肌组织中的表达,并对其进行半定量比较。
2.检测小鼠结肠平滑肌上BKCa基因各个剪切位点的表达利用基因库中小鼠BKCaα亚基全长序列,分成14段,设计引物,用RT-PCR的方法分段检测小鼠结肠平滑肌上BKCaα亚基的表达。
结果:
1.在小鼠无论在mRNA水平还是在蛋白水平,胃和结肠平滑肌BKCa的表达均比十二指肠、回肠部位丰富。
2.结肠平滑肌上BKCaα亚基mRNA缺失第19号外显子(应激调控外显子,STREX),在其他位点未检测到外显子剪切。对照实验中,证实第15天胚胎脑组织BKCaα亚基含有第19号外显子。
结论:
1.在小鼠消化道各节段,胃和结肠平滑肌上BKCa的表达明显高于十二指肠和回肠。
2.小鼠结肠平滑肌上BKCaα亚基未表达第19号外显子序列,其表型为缺失应激调控外显子型,即ZERO型。