长非编码RNA-IRAIN在非小细胞肺癌中的作用研究

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肺癌是肿瘤相关性疾病中致死性最高的恶性肿瘤,男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位,女性发病率和死亡率占第二位。而非小细胞肺癌占所有肺癌病例的80%。目前,肺癌中最常用的治疗手段为综合治疗,即手术、化疗和药物治疗联合。但是,非小细胞肺癌患者的5年生存率仍然很低。因此,全面探究非小细胞肺癌的基因和分子特征来探索更有效的治疗手段迫在眉睫。肺癌的发生发展是一个多步骤、多阶段、多基因突变、累积的过程,长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在此过程中发挥着重要的作用,通过对靶基因的调控调节细胞的分化、增殖和凋亡,参与肿瘤的生长、侵袭和转移。lncRNA-IRAIN是IGF1R的反义长非编码RNA,与IGF1R DNA启动子和增强子之间的内环结构有关。大量文献已经报道IGF1R信号通路可以调控细胞的增殖、分化和凋亡,参与了非小细胞肺癌的发生发展及EGFR-TKIs的耐药。但IRAIN与肺癌的关系及其发挥的作用尚未有文献报道。在本研究中,我们首次探讨了 IRAIN在非小细胞肺癌中的表达及与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性,并从体内和体外两个水平初步证实其可通过调控细胞周期进程发挥促癌作用,提示IRAIN有望成为非小细胞肺癌治疗的新靶点。第一部分IRAIN在非小细胞肺癌的表达及与临床病理相关性目的:检测IRAIN在非小细胞肺癌组织中的表达。方法:应用qRT-PCR的方法检测IRAIN在47例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)肿瘤组织和其癌旁正常组织中的相对表达量;并分析其表达水平与非小细胞肺癌患者临床病理特征(包括年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、组织类型、肿瘤分期、肿瘤分级、淋巴结转移)之间的关系。结果:1.与癌旁组织相比,IRAIN在肺癌组织中高表达(P<0.05)。2.IRAIN的表达水平可能与肿瘤大小及吸烟状态有关系,而与年龄、性别、组织类型、肿瘤分期、肿瘤分级、是否淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:IRAIN在非小细胞肺癌中可能发挥促癌基因的作用。第二部分IRAIN对非小细胞肺癌细胞功能的影响目的:探讨IRAIN在非小细胞肺癌发生发展中可能发挥的作用。方法:构建IRAIN的小干扰序列(siRNA)及IRAIN的过表达质粒(pcDNA3.1-IRAIN),分别以乱序(Scrambled)及空质粒(pcDNA3.1)作为对照组,在肺癌细胞株(A549和SPCA1)中转染上述干扰序列及过表达载体,利用增殖实验(cck-8)、流式细胞实验、AnnexinV-PI双染法检测体外IRAIN对肺癌细胞增殖、周期、凋亡的影响。选取体重(16±2)克BALB/C nu/nu鼠6只,随机分为2组,每组3只,在其腋下接种转染了敲低IRAIN的重组腺病毒质粒(sh-IRAIN)或其对照(sh-scr),每4天测量瘤体大小,接种32天后颈椎脱臼法处死小鼠,剥除瘤体称重。结果:1、cck-8实验表明:转染siRNA的肺癌细胞较对照组增殖能力明显下降。同时,过表达IRAIN的肺癌细胞较对照组增殖能力显著增加。2、细胞周期结果表明:IRAIN敲低组与对照组比较,肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0-G1期,而进入S期的细胞减少,抑制细胞的增殖。同时,过表达组较对照组,G0-G1期的细胞减少,进入到S期的细胞增多,促进细胞周期的进程。3、凋亡实验表明:敲低IRAIN前后,肺癌细胞的凋亡能力无明显变化。4、体内实验表明:敲低IRAIN后,移植瘤的生长受到抑制。结论:IRAIN可促使肺癌细胞进入S期,促进肺癌细胞的增殖。
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