一株广义美味牛肝菌菌丝体的培养基优化及与滇青冈共培养的初步研究

来源 :云南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenzhong1983
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牛肝菌属(Boletus)隶属于担子菌门(Basidiomycota),伞菌纲(Agaricomycetes),牛肝菌目(Boletales),牛肝菌科(Boletaceae),为世界广布大属,是一类与植物共生的菌根真菌。该属真菌味道鲜美,且含有抗氧化、抗肿瘤等生理活性物质,因而具有很高的经济价值和研究前景。目前,牛肝菌尚难以进行人工栽培,其子实体完全依赖野外采收。云南的自然资源丰富,野生牛肝菌产量大,但因近年气候变化、生态破坏等原因其自然产量已经严重下降且售价昂贵。   广义的美味牛肝菌复合群(Boletus edulis Complex)中的种类大都为著名的可食用真菌,在牛肝菌属中具有典型代表性,且在云南分布广泛。本文以武定狮子山采集的一株广义美味牛肝菌子实体为材料,从菌种分离鉴定,菌丝培养组份优化,促菌丝生长天然活性物质提取,菌丝体与共生植物共培养体系的建立等方面进行了研究,为牛肝菌菌丝体的规模化培养、共生机理的研究、人工或半人工驯化等奠定了重要基础。   本文主要研究结果如下:   1.利用ITS分子标记,对子实体和分离菌丝体进行了鉴定,将ITS序列与GenBank中牛肝菌种类的相关序列进行比对,表明所采子实体及分离菌丝属于一种广义美味牛肝菌(Boletus eduliss.l.);   2.从碳源、氮源、C/N比例等方面对菌丝体的基本培养基进行了优化,结果表明,碳源以淀粉、麦芽糖较好,配合少量葡萄糖可提高菌丝体对新培养基的适应能力;氮源以蛋白胨、NH4Cl、NH4NO3较好;在以蛋白胨为氮源的培养基中,C/N比以5∶1-10∶1较合适;培养基总糖浓度不应大于1%;   3.对牛肝菌生境中的土壤、松针进行了水提取及有机溶剂提取,并将提取物添加入培养基中,结果表明,土壤、干/鲜松针的有机溶剂提取物在培养基中浓度为1.0 mg/mL时对菌丝体生长有明显抑制作用,当浓度降低到0.01-0.1 mg/mL时仍然没有表现出促进作用;干松针水提物浓度在2.0-10.0 mg/mL范围时对菌丝体生长有明显的促进作用,据此推断,1000 mL培养基中可以添加30-100 g干松针粉末;   4.在培养基上利用野外采集的滇青冈(Cyclobalanopsis glaucoides)种子萌发得到了无菌苗,并利用无菌苗的茎段诱导出了愈伤组织;在共培养基上(真菌培养基与植物培养基1∶1混合),同时接种愈伤组织和分离菌丝体,结果表明,共培养基更适合菌丝体的生长,菌丝长势快,几乎要盖过了愈伤组织,愈伤组织有滞长现象但没有死亡;本研究初步建立了菌丝与愈伤组织的共培养体系,而更加完善的共培养体系及共培养机理有待于进一步研究。
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