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牛肝菌属(Boletus)隶属于担子菌门(Basidiomycota),伞菌纲(Agaricomycetes),牛肝菌目(Boletales),牛肝菌科(Boletaceae),为世界广布大属,是一类与植物共生的菌根真菌。该属真菌味道鲜美,且含有抗氧化、抗肿瘤等生理活性物质,因而具有很高的经济价值和研究前景。目前,牛肝菌尚难以进行人工栽培,其子实体完全依赖野外采收。云南的自然资源丰富,野生牛肝菌产量大,但因近年气候变化、生态破坏等原因其自然产量已经严重下降且售价昂贵。
广义的美味牛肝菌复合群(Boletus edulis Complex)中的种类大都为著名的可食用真菌,在牛肝菌属中具有典型代表性,且在云南分布广泛。本文以武定狮子山采集的一株广义美味牛肝菌子实体为材料,从菌种分离鉴定,菌丝培养组份优化,促菌丝生长天然活性物质提取,菌丝体与共生植物共培养体系的建立等方面进行了研究,为牛肝菌菌丝体的规模化培养、共生机理的研究、人工或半人工驯化等奠定了重要基础。
本文主要研究结果如下:
1.利用ITS分子标记,对子实体和分离菌丝体进行了鉴定,将ITS序列与GenBank中牛肝菌种类的相关序列进行比对,表明所采子实体及分离菌丝属于一种广义美味牛肝菌(Boletus eduliss.l.);
2.从碳源、氮源、C/N比例等方面对菌丝体的基本培养基进行了优化,结果表明,碳源以淀粉、麦芽糖较好,配合少量葡萄糖可提高菌丝体对新培养基的适应能力;氮源以蛋白胨、NH4Cl、NH4NO3较好;在以蛋白胨为氮源的培养基中,C/N比以5∶1-10∶1较合适;培养基总糖浓度不应大于1%;
3.对牛肝菌生境中的土壤、松针进行了水提取及有机溶剂提取,并将提取物添加入培养基中,结果表明,土壤、干/鲜松针的有机溶剂提取物在培养基中浓度为1.0 mg/mL时对菌丝体生长有明显抑制作用,当浓度降低到0.01-0.1 mg/mL时仍然没有表现出促进作用;干松针水提物浓度在2.0-10.0 mg/mL范围时对菌丝体生长有明显的促进作用,据此推断,1000 mL培养基中可以添加30-100 g干松针粉末;
4.在培养基上利用野外采集的滇青冈(Cyclobalanopsis glaucoides)种子萌发得到了无菌苗,并利用无菌苗的茎段诱导出了愈伤组织;在共培养基上(真菌培养基与植物培养基1∶1混合),同时接种愈伤组织和分离菌丝体,结果表明,共培养基更适合菌丝体的生长,菌丝长势快,几乎要盖过了愈伤组织,愈伤组织有滞长现象但没有死亡;本研究初步建立了菌丝与愈伤组织的共培养体系,而更加完善的共培养体系及共培养机理有待于进一步研究。