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猪肉是世界上人们食用动物蛋白的重要来源。提高母猪的窝产仔数性状可以提高母猪窝产肉产量,但是由于猪产仔数性状遗传力低,且为限性性状,通过常规选择遗传进展缓慢。分子标记辅助的发展与应用为猪产仔数性状的遗传改良提供契机。在前期研究中,我们通过基因芯片法筛选出一些大白猪和中国太湖猪排卵前卵泡差异表达基因。其中,CYR61基因能够在动物的发情周期中维持血管系统的完整、对胎盘的发育和血管生长起重要作用以及在妊娠期间维持各种生理因素的稳定;GALP基因则能够在体液和神经两个方面调控动物的性行为。因此,我们选取了两个差异表达基因——CYR61和GALP基因作为影响猪产仔数性状候选基因进行了研究,取得如下研究结果: 1.CYR61基因:(1)通过CYR61基因组序列与cDNA序列比对,在猪CYR61基因的第五外显子上发现一个SNP(C→T);(2)建立了该多态位点PCR-AluⅠ-RFLP检测技术。在梅山猪、大白猪、DIV系猪等9个猪群中进行了基因型频率和基因频率分析,结果表明只有在大白猪和淮南猪检测出三种基因型,在梅山猪等6个群体中只存在AA型;在所检测的9个群体中A等位基因的频率为0.65-1,是优势等位基因。(3)产仔数性状关联分析结果显示各基因型之间没有显著性差异(P>0.05)。 2.GALP基因(sus9):通过克隆测序比对,在猪GALP基因的第三外显子和第一内含子分别发现一个SNP位点,建立了相应的PCR-RFLP方法。 1)GALP外显子三:(1)在外显子三上发现一个SNP位点(C→G),建立了该多态性位点PCR-HhaⅠ-RFLP检测技术。在梅山猪、大白猪和DIV系猪等8个猪群中进行了基因型频率和基因频率分析,结果表明在大白猪、DIV系猪、杜洛克猪和皮特兰猪中检测出三种基因型,在梅山猪等4个群体中DD基因型的频率为0。在所检测的8个群体中D等位基因的频率为0.62-1,是优势等位基因。(2)产仔数性状关联分析结果显示:CC基因型和CD基因型在大白猪所有胎次产仔数上差异显著(P<0.05);CC基因型和CD基因型在大白猪所有胎次活仔数上差异显著(P<0.05)。在DIV系猪所有胎次产仔数CC基因型和CD基因型差异显著(P<0.05);在DIV系猪所有胎次活仔数CC基因型和CD基因型差异极显著(P<0.01)。 2)GALP内含子一:(1)在内含子一发现一个SNP位点(C→G),建立了该多态位点PCR-AluⅠ-RFLP检测技术。在梅山猪、大白猪和DIV系猪等10个猪群中进行了基因型频率和基因频率分析,结果表明在大白猪、DIV系猪、白色杜洛克猪、杜洛克猪和皮特兰猪中检测出三种基因型,在梅山猪等五个品种中EE基因型频率为0,在所检测的8个群体中F等位基因的频率为0.62-1,是优势等位基因。(2)产仔数性状关联分析结果显示:EE和FF型在DIV系猪所有胎次活仔数上差异显著(P<0.05),在大白猪所有胎次产仔数的加性效应值为-0.53±0.16头/胎(P<0.01)。 3.GALP启动子:利用软件BDGP,从猪GALP基因的转录起始位点上游1380bp的序列预测了核心启动子,克隆并构建了5个缺失片段的PGL-3表达载体。然后将这五个片段与PGL3-Basic阴性对照组一起转染到Hela细胞系和CHO细胞系中,鉴定了转录活性始于第四个片段内;第三个和第二个片段含有负调控元件,其中第二个是强负调控序列;第一个核心启动子区内有正调控元件。 4.GALP基因组织表达谱:利用实时荧光定量PCR方法鉴定了GALP基因在卵泡、心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、大脑、小脑、小肠、输卵管和脂肪13个组织中的表达情况,发现GALP基因在大脑和卵泡中的高表达。 上述研究结果表明;GALP基因第三外显子上HhaⅠ和第一内含子上AluⅠ两个多态性位点可以作为猪产仔数性状的新的分子标记。