靶向NRP-1基因的siRNA对Hep-2细胞增殖及mRNA表达的影响

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背景和目的   喉癌是喉部最常见恶性肿瘤,其发病率目前有明显增长趋势。20世纪80年代以来,通过手术、放、化疗和免疫治疗的联合应用,大大提高了喉癌患者的5年生存率。但手术、放疗和化疗并发症多、毒副作用大,且严重影响患者的生活质量,手术后复发和转移仍是喉癌患者的主要致死因为。因此寻找新的有效、简便的治疗方法成为耳鼻咽喉科工作者关注的焦点。RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是近年来发展起来的分子生物学领域一个新技术.本研究以Hep-2细胞株中NRP-1基因作为研究靶点,运用RNA干扰技术阻断基因表达后观察其对Hep-2细胞增殖、mRNA表达的影响。   方法:   根据siRNA靶序列设计原则,设计并合成出NRP-1基因3个位点的干扰序列,通过脂质体转染Hep-2细胞,分别从形态学及应用MTT,RT-PCR方法检测其干扰效果。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学处理,计量资料以(x)±s表示,多组间比较采用方差分析,用LSD-t检验法进行组间两两比较,判定标准:P<0.05有统计学意义。   结果:   1.形态学检测:转染组细胞可见皱缩、变圆,部分脱落,尤以744位点组较明显;   2.MTT结果显示靶向NRP-1基因744位点的siRNA转染Hep-2细胞后,细胞增殖活性受抑制情况与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);   3.RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,与对照组相比,干扰组744位点NRP-1mRNA表达水平显著下降。   结论:   1.靶向NRP-1基因744位点的siRNA对喉癌Hep-2细胞的生长有明显抑制作用,且有时间依赖性。   2.靶向NRP-1基因744位点的siRNA能有效的抑制喉癌Hep-2细胞的NRP-1mRNA的表达。
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