【摘 要】
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研究目的:1.探究汉塞巴通体是否可形成活的非可培养（VBNC）状态。2.研究汉塞巴通体VBNC状态的生理特性与药物敏感性。3.研究汉塞巴通体VBNC状态的形成机制。研究方法:1.在本实验室此前建立的SYBR Green I/PI细菌活性染色法的基础上,针对汉塞巴通体对染料的浓度、配比、染色时间等进行了优化,建立汉塞巴通体VBNC状态的检测方法。2.通过38.8℃培养或药物处理汉塞巴通体,使其进入V
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研究目的:1.探究汉塞巴通体是否可形成活的非可培养（VBNC）状态。2.研究汉塞巴通体VBNC状态的生理特性与药物敏感性。3.研究汉塞巴通体VBNC状态的形成机制。研究方法:1.在本实验室此前建立的SYBR Green I/PI细菌活性染色法的基础上,针对汉塞巴通体对染料的浓度、配比、染色时间等进行了优化,建立汉塞巴通体VBNC状态的检测方法。2.通过38.8℃培养或药物处理汉塞巴通体,使其进入VBNC状态。3.透射电镜观察汉塞巴通体VBNC状态的细胞结构变化。4.通过SYBR Green I/PI细菌活性染色法评估VBNC状态的汉塞巴通体对药物的敏感性。5.使用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合质谱技术和RT-q PCR等方法,研究汉塞巴通体VBNC状态形成的机制。研究结果:1.SYBR Green I/PI活性染色方法比PMA-q PCR的方法更加简便,快捷,使用此方法计数的活菌数目更为接近真实的活菌量。2.汉塞巴通体在38.8℃培养或者达托霉素、链霉素、庆大霉;‘素处理下都可进入VBNC状态,将VBNC状态的汉塞巴通体转移至新鲜培养基,使细菌处于适宜环境可使其复苏至可培养状态,并且添加羊血有助于该菌更好的复苏。3.通过透射电子显微镜观察发现VBNC状态的汉塞巴通体具有完整的细胞膜,细胞壁结构和丰富的胞内容物,胞内物质相比于对数期和稳定期细菌更加致密。4.VBNC状态的汉塞巴通体相比于对数期细菌高表达铁吸收调节蛋白,而产能相关蛋白质和DNA复制相关的蛋白质表达降低。5.汉塞巴通体的VBNC状态与对数期相比高表达毒素基因（yaf Q1,yaf Q2）,持留基因（glp D,spo T）,药物泵基因（acr B,mac B,vec B）和感染内皮细胞相关基因（baf A,trw E,vri B4）。研究结论:1.SYBR Green I/PI活性染色是研究汉塞巴通体VBNC状态的有效方法。2.汉塞巴通体能够进入VBNC状态,并且条件适宜时可复苏至可培养状态。3.汉塞巴通体的VBNC状态具有完整的膜结构和胞内容物。4.VBNC状态的汉塞巴通体较稳定期持留菌对抗生素更加耐受,更难被药物杀死。5.汉塞巴通体的VBNC状态产能和DNA复制相关蛋白质水平表达下调,高表达药物泵基因和持留基因,并且感染内皮细胞相关基因表达也上调。但该结论还需使用遗传学手段进一步验证。
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