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慢性粒细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）是一种骨髓造血细胞克隆性异常增生性血液系统肿瘤,其临床症状以外周血白细胞增多、肝脾肿大为主。通常认为,慢性粒细胞白血病的发病机制是在染色体水平上第9号染色体与第22号染色体长臂相互易位,进而形成BCR-ABL融合基因,该融合基因编码的bcr-abl融合蛋白具有较强的酪氨酸激酶活性,在CML的发生发展中其具有至关重要的作用。在针对CML的治疗上,抑制酪氨酸激酶的活性则成为行之有效的治疗手段。但仍有一部分的患者对酪氨酸激酶抑制剂无敏感性。长期以来,全反式维甲酸ATRA作为分化诱导剂是被广泛应用于CML患者的治疗方式之一,但由于ATRA具有较为严重的不良反应,极大的限制了其临床应用。4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯是由本课题组在全反式维甲酸ATRA的结构基础上设计并合成的新型维甲酸衍生物。前期研究证实ATPR具有明显的诱导K562细胞分化的作用,但其作用机制目前仍尚不完全清楚,亟待于进一步的探寻。为进一步丰富完善ATPR诱导CML细胞分化的作用机制及核糖体蛋白RPS3在ATPR诱导慢粒细胞分化过程中的作用。本研究选取K562细胞株作为研究对象,体外实验观察ATPR对RPS3表达的影响及RPS3在ATRP诱导K562细胞分化过程中的作用。本课题主要研究内容包含以下四个部分:1.ATPR对K562细胞株中RPS3表达水平及细胞周期水平的影响本研究采用ATPR（10-66 M）对K562细胞进行药物处理,分别选用Western blot分析及Real-time PCR对RPS3的蛋白及mRNA水平进行检测。同时通过流式细胞术检测ATPR（10-66 M）处理K562细胞后细胞周期的变化。结果显示:体外ATPR能够明显降低K562细胞中RPS3的表达,且ATPR能够将K562细胞阻滞在G1期。2.RPS3在ATPR诱导K562细胞分化过程中的作用采用RPS3-siRNA下调RPS3的表达水平后,给予K562细胞ATPR（10-66 M）处理后,通过Western blot技术检测RPS3、CDK4、Cyclin D3的表达水平,使用流式细胞仪检测细胞表面分化抗原CD11b与CD133的表达水平,同时采用Western blot技术对CD11b与CD133进行蛋白定量分析。结果显示:沉默RPS3能够促进ATPR对CDK4与Cyclin D3的抑制作用,同时沉默RPS3能够促进ATPR对细胞表面分化抗原CD11b与CD133的上调作用。为进一步探究RPS3对ATPR诱导的K562细胞分化的影响,使用过表达质粒pEGFP-N1-RPS3转染K562细胞,以上调细胞中RPS3的表达水平,通过Western blot技术检测RPS3、CDK4、Cyclin D3、CD11b及CD133的表达水平。结果显示:过表达RPS3能够抑制ATPR下调CDK4与Cyclin D3的作用,且过表达RPS3能减弱ATPR对细胞表面分化抗原CD11b与CD133的上调作用。3.Hippo信号通路在ATPR诱导K562细胞分化过程中的作用采用RPS3-siRNA下调RPS3的表达水平后,给予K562细胞ATPR（10-66 M）处理后,通过Western blot技术检测MST、SAV、LATS及YAP蛋白表达水平,通过Real-time PCR检测上述因子的基因表达水平变化。与此同时使用过表达质粒pEGFP-N1-RPS3转染K562细胞,以上调细胞中RPS3的表达水平,通过Western blot技术检测MST、SAV、LATS及YAP蛋白表达水平,通过Real-time PCR检测上述因子的基因表达水平变化。结果显示:ATPR能够明显降低MST、SAV、LATS与YAP的表达水平,沉默RPS3能够促进ATPR对上述蛋白的抑制作用,而过表达RPS3则能够使ATPR的抑制作用大幅度减弱。使用过表达质粒pEGFP-N1-RPS3转染K562细胞,以上调细胞中RPS3的表达水平,通过Western blot技术与Real-time PCR检测上述相关蛋白的表达变化。结果显示:过表达RPS3能够抑制ATPR下调MST、SAV、LATS与YAP的作用4.ATPR对NB4与THP-1细胞株中RPS3表达水平的影响。采用ATPR（10-66 M）对K562细胞进行药物处理,分别选用Western blot分析RPS3的蛋白水平进行检测。结果显示:体外ATPR能够明显降低NB4与THP-1细胞中RPS3的表达。