大豆rbcS基因启动子的遗传转化及功能分析

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:ouyang0078
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所有的高等植物中都存在Rubisoo,此酶在光合作用时的起到主要作用的,它既对CO2的固定起到催化作用,又是高等植物中的氮的主要储藏形式,是目前植物酶中研究比较深入的酶。Rubisco中的小亚基rbcS基因的SRS4启动子受光的表达调控。本文对大豆rbcS基因的启动子及其5’缺失体在烟草中的遗传转化进行了研究,证明了其对转基因作物的培育具着十分重要价值。本实验通过农杆菌介导的叶盘转化法对烟草进行转化,并研究了该启动子及其5’缺失体的功能和其是否能稳定遗传,主要研究结果如下;1.对烟草的转化体系进行了优化,改良了几个与转化相关的影响因素。利用已经进行了优化的遗传体系,将pcAMBIA-GrbcSP, pcAMBIA-GrbcS3和pcAMBIA-GrbcS5的质粒经由农杆菌导入烟草中去,从而获得了有Kan抗性的烟草27棵,经鉴定其中有22棵为阳性植株。其中获得了11棵含pCAMBIA-GrbcSP的农杆菌重组菌株的阳性烟草苗:6棵含pCAMBIA-GrbcS3的农杆菌重组菌株的阳性烟草。6棵含pCAMBIA-GrbcS5的农杆菌重组菌株的阳性烟草。2.将抗性烟草利用PCR检测并进行了GUS染色分析,初步表明在烟草的基因组上已含有外源目的片段并且gus基因可成功表达。3.将pcAMBIA-GrbcSP, pcAMBIA-GrbcS3和pcAMBIA-GrbcS5将正常培养的植株先放在暗处进行避光处理7d后,将其改放在正常的光照下进行培养,可知嫩叶和成熟叶中的gus基因的表达量发生变化,但对叶中gus基因的表达量的变化的研究可知,大豆rbcS基因启动子有一定的光诱导性。4.对所得的TO代植株进行培养得到的T1代植株。对烟草苗进行DNA的提取,并对其gus基因进行检测,可得知T1代中的阳性转基因苗,并对苗进行光诱导,可知T1代中光诱导得到的结论与T0代的一致,可证明大豆rbcS基因SRS4启动子的光诱导特性在T1代中也是稳定遗传的。
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