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目的:动脉硬化闭塞症(Arteriosclerosis obliterans,ASO)是最常见的一类周围血管疾病,已严重危害中老年人的健康。血管平滑肌细胞表型转化是ASO的重要病理过程,但其具体分子机制尚不完全清楚。因此进一步揭示和阐明血管平滑肌细胞表型转化在ASO发生发展中的作用及其分子机制对于早期诊断和治疗ASO具有重要意义。microRNAs(miRNAs)长约18~22bp,是一类内源性非编码单链小RNA,其通过结合靶基因3’-非编码区(3’-UTR)在转录后水平对基因表达起负调控作用,从而调节细胞的增殖、分化、迁移和凋亡等。既往研究证实miRNAs在ASO的病理生理过程中起重要作用,其有望成为早期诊断和治疗ASO的靶点。我们前期的实验通过miRNA基因芯片进行筛选,发现miR-4306在ASO患者的血浆中表达降低,初步推断miR-4306可能涉及ASO的发生和发展过程,然而其具体作用机制仍然不清楚。细胞自噬是一种细胞内细胞器、细胞质等的亚细胞结构降解途径,在真核细胞中高度保守。大量研究表明细胞自噬在ASO的发生和发展中具有重要作用,同时细胞自噬参与了血管平滑肌细胞表型转化。然而关于miR-4306是否调控血管平滑肌细胞表型转化中自噬从而参与ASO的进程仍不清楚。因此,本研究初步探讨了miR-4306在调控血管平滑肌细胞表型转化中自噬所起的作用以及具体机制。方法:选取3对ASO患者及正常对照组患者的血浆通过miRNA基因芯片进行杂交,基于基因芯片筛选ASO患者血浆中miRNAs差异表达的结果,在ASO患者和正常人群血浆和血管内膜组织中用RT-qPCR验证miR-4306的表达,并结合临床Fontaine分期比较分析。氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)诱导人主动脉平滑肌细胞(Human aortic smooth muscle cells,HASMCs)模拟动脉粥样硬化,建立细胞模型,通过RT-qPCR检测miR-4306的相对表达量。Western-Blot检测表型转化成骨相关蛋白(Runx-2、OPN)、自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-B)的相对表达量。通过转染miR-4306 mimic和miR-4306 inhibitor上调或下调miR-4306的表达以及加入自噬抑制剂3-MA,WB检测表型转化成骨相关蛋白(Runx-2、OPN)的相对表达量。最后,通过TargetScan分析预测miR-4306在参与调控血管平滑肌细胞表型转化过程中自噬潜在的靶基因。进一步探索miR-4306调控Ox-LDL诱导HASMCs表型转化中自噬的作用及具体机制。结果:miRNA基因芯片筛选结果显示,与正常对照组相比,miR-4306在ASO患者血浆中的表达显著降低(P<0.05)。RT-qPCR进一步在ASO患者血浆及血管内膜组织中验证miR-4306的表达,结果表明miR-4306在ASO患者血浆及血管内膜组织中的表达均显著降低(P<0.05)。随后在Ox-LDL诱导HASMCs表型转化中,miR-4306的表达较正常对照组降低(P<0.05),成骨相关蛋白(Runx-2、OPN)、自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-B)的表达较正常对照组升高(P<0.05)。在Ox-LDL诱导HASMCs表型转化中上调miR-4306后成骨相关蛋白(Runx-2、OPN)的表达较正常对照组降低(P<0.05),但自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-B)的表达较正常对照组升高(P<0.05)。加入自噬抑制剂3-MA后,与正常对照组相比,Runx-2、OPN的表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、miR-4306在ASO患者血浆及血管内膜组织中的表达均明显降低,且在Ox-LDL诱导HASMCs中表达明显降低。2、Ox-LDL诱导HASMCs过程中,促进其表型转化,同时伴自噬参与。3、上调miR-4306抑制Ox-LDL诱导HASMCs表型转化。4、Ox-LDL诱导HASMCs表型转化中,上调miR-4306促进平滑肌细胞自噬。