尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)是我国重要经济养殖鱼类。近年来,由无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染引起的罗非鱼无乳链球菌病频繁发生,给该产业造成了严重经济损失。疫苗免疫是相对药物治疗等其他方式更为安全有效的理想防控措施,但免疫反应是一种受机体、抗原和环境等因素影响的复杂生理过程。为评价免疫接种后罗非鱼对无乳链球菌的抵抗能力是否受环境胁迫影响,本论文以温度、间歇性低溶氧、高盐和禁食为胁迫因子,建立环境胁迫尼罗罗非鱼生物模型,开展环境胁迫对尼罗罗非鱼抗无乳链球菌免疫应答的影响研究。本研究不仅对环境胁迫如何影响尼罗罗非鱼免疫反应和疫苗效力的评价十分必要,也为采用疫苗接种方式预防罗非鱼无乳链球菌病时疫苗效力发挥最优化提供科学参考依据。主要研究结果如下:1.为评价免疫接种后,温度对尼罗罗非鱼免疫反应和疫苗效力的影响,免疫接种的罗非鱼分别在水温为21、25、29和33°C的环境下饲养。结果显示,21°C和33°C免疫组鱼脾脏和头肾组织IgM、IL-1β、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平显著低于29°C免疫组鱼;白细胞总数和中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞绝对数量、血清抑菌能力和白细胞吞噬活性在21°C免疫组鱼中均为最低;白细胞呼吸爆发活性和特异性抗体水平随温度的升高呈先上升后下降显著变化趋势。所有试验组在相同温度下感染无乳链球菌,21°C免疫组鱼的存活率显著低于其他免疫组鱼,而25、29和33°C免疫组间存活率差异不显著;这表明在水温为21°C时对罗非鱼进行免疫接种后,其免疫反应和对无乳链球菌抵抗能力会显著降低。2.为评价不同温度下间歇性低溶氧对尼罗罗非鱼免疫调节的影响,尼罗罗非鱼经免疫接种后,分别在30°C和35°C水温下进行间歇性低溶氧(4.0±1.0mg/L DO)和常氧(8.0±0.5 mg/L DO)环境饲养。结果显示,在间歇性低氧环境下,免疫的鱼脾脏和头肾组织细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN-γ)表达水平、血清抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性、白细胞吞噬活性和头肾组织细胞呼吸爆发活性均显著降低;组织切片观察发现,在间歇性低氧环境下的鱼小肠绒毛出现脱落,且脾脏组织细胞间质增生。无乳链球菌感染后第1天,在30°C和35°C间歇性低氧环境下,免疫的鱼脾脏和头肾组织载菌量均显著高于常氧组;感染14天后,免疫的鱼在35°C间歇性低氧组中的存活率显著降低;这表明免疫接种后间歇性低溶氧环境对尼罗罗非鱼的免疫调节具有一定的抑制作用。3.为评价盐度对尼罗罗非鱼免疫反应和疫苗效力的影响,尼罗罗非鱼经免疫接种后,分别在盐度为0、10、20和30‰环境下饲养。随盐度水平梯度升高至30‰后,30‰组鱼出现持续性死亡现象,鱼体表出现不同程度的皮肤损伤,部分鱼可见皮下出血,且鳃丝上的鳃小片脱落严重。在任一盐度下,血清皮质醇水平均显著升高;在20和30‰盐度下,免疫接种的罗非鱼免疫相关基因(IgM、IL-1β和IFN-γ)mRNA表达水平、白细胞总数、淋巴细胞绝对数量、血清抑菌能力和特异性抗体水平均被显著抑制。经无乳链球菌感染后,免疫接种的罗非鱼在20‰盐度下存活率显著降低,这表明≥20‰的盐度胁迫能够显著抑制免疫接种后尼罗罗非鱼的免疫反应和疫苗保护效力。4.为评价禁食对尼罗罗非鱼抗无乳链球菌感染能力的影响,对免疫接种28天和未免疫接种的尼罗罗非鱼进行0、1、3和7天禁食处理,禁食胁迫后对其感染无乳链球菌。结果显示,免疫和未免疫的鱼血清皮质醇水平随禁食时间的延长呈先下降后上升趋势;而抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性、细胞因子(IL-1β和IL-6)表达水平和免疫的鱼血清特异性抗体水平变化与皮质醇相反,在禁食后第7天均为最低。葡萄糖含量在禁食后第3天和第7天下降不显著,这可能与禁食后肝糖原、甘油三酯、总胆固醇含量和糖酵解关键酶(HK和PK)活性显著下降而糖异生关键酶(PEPCK)活性显著升高的自身糖代谢调节有关。无乳链球菌感染后,对未免疫的鱼而言,禁食3天组的存活率显著高于禁食7天组;但对免疫的鱼而言,经不同禁食时间胁迫后其对无乳链球菌的抵抗能力差异不显著;这表明适当的禁食有助于提高未免疫接种的罗非鱼对无乳链球菌的抵抗能力。