【摘 要】
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目的:既往报道MUC16可以影响胚胎的种植,但是目前MUC16在孕早期的作用尚不清楚。NK细胞是孕早期蜕膜中主要的免疫细胞,Siglec-9受体是NK细胞上与MUC16相互结合的重要的免疫抑制性受体。本文主要探索MUC16通过NK细胞对滋养细胞迁移能力和血管内皮细胞血管新生能力的调节作用。方法:1.收集并比较正常生育力女性胚胎移植后20天,35天和50天的外周血中MUC16的表达水平。2.收集正常
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目的:既往报道MUC16可以影响胚胎的种植,但是目前MUC16在孕早期的作用尚不清楚。NK细胞是孕早期蜕膜中主要的免疫细胞,Siglec-9受体是NK细胞上与MUC16相互结合的重要的免疫抑制性受体。本文主要探索MUC16通过NK细胞对滋养细胞迁移能力和血管内皮细胞血管新生能力的调节作用。方法:1.收集并比较正常生育力女性胚胎移植后20天,35天和50天的外周血中MUC16的表达水平。2.收集正常早孕妇女的外周血,使用磁珠分选的方法分离NK细胞。实验分为3组:对照NK细胞组,重组蛋白MUC16（rh MUC16）（1μg/m L）处理的NK细胞组,rh MUC16（1μg/m L）与抗Siglec-9抗体（Siglec-9受体抑制剂）（2.5μg/m L）共同处理的NK细胞组。培养5天后,用PBS清洗NK细胞,用普通培养基继续培养24小时,收集上清。观察不同处理后的NK细胞上清对滋养细胞的迁移能力和血管内皮细胞的成管功能的影响。3.收集正常早孕妇女的外周血,使用磁珠分选的方法分离NK细胞。实验分为4组:对照NK细胞组,rh MUC16（1μg/m L）处理的NK细胞组,rh MUC16（1μg/m L）与ERK抑制剂PD98059（5μM）共同处理的NK细胞组,rh MUC16（1μg/m L）与ERK抑制剂GDC-0994（10μM）共同处理的NK细胞组。培养5天后,用PBS清洗NK细胞,用普通培养基继续培养24小时,收集上清。观察抑制ERK信号通路是否改变MUC16蛋白通过NK细胞对滋养细胞迁移能力和血管内皮细胞成管功能的影响。结果:1.检测30例正常生育力女性胚胎移植后20天、35天和50天的外周血中MUC16的表达水平,结果显示:正常育龄期女性的胚胎移植后20天的外周血中MUC16为54.8±76.7 U/m L,移植后35天的外周血中MUC16为61.2±34.8 U/m L,移植后50天的外周血中MUC16为36.9±19.4 U/m L（血清中MUC16正常范围:0-35 U/m L）。2.检测不同处理的NK细胞上清作用后滋养细胞（JEG3滋养细胞系）的迁移能力,结果显示:rh MUC16处理后的NK细胞上清能显著增强滋养细胞的迁移能力（P＜0.05）,而rh MUC16与抗Siglec-9抗体共同处理后的NK细胞上清对滋养细胞的迁移能力无明显影响（P＞0.05）。检测不同处理的NK细胞上清作用后脐静脉内皮细胞（HUVEC细胞系）的成管能力,结果显示:rh MUC16处理后的NK细胞上清能明显抑制脐静脉内皮细胞的成管能力（P＜0.001）,而rh MUC16与抗Siglec-9抗体共同处理后的NK细胞上清对脐静脉内皮细胞的成管能力无显著影响（P＞0.05）。3.我们发现rh MUC16刺激的NK细胞半小时后,NK细胞中ERK1/2磷酸化水平显著升高。进一步地,我们发现加用ERK抑制剂（PD98059或GDC-0994）处理NK细胞后,能逆转MUC16处理后的NK细胞对滋养细胞的迁移能力的促进作用（P＜0.01;P＜0.001）;同时,也能显著逆转对脐静脉内皮细胞的成管能力的抑制作用（P＜0.001;P＜0.001）。结论:MUC16在孕早期呈现高表达。MUC16可通过作用于NK细胞的Siglec-9受体促进滋养细胞的迁移能力,并抑制血管内皮细胞的血管新生能力。在机制上,MUC16可能通过激活NK细胞的ERK1/2信号通路,从而改变NK细胞的分泌与调节能力。
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