目的:　　1.体外建立结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)模型（TGF-β1诱导），通过模型对中药半枝莲多糖抗EMT作用进行筛选，并进一步分离、纯化，研究活性多糖对结肠癌细胞（HT-29）的增殖、转移和侵袭能力的影响，初步探讨活性多糖的作用机制。　　2.体内建立结肠癌细胞脾脏肝转移模型，观察活性多糖对结肠癌细胞肝转移情况的影响。　　方法:　　1.采用沸水提取、乙醇沉淀和冷冻干燥的方法获得半枝莲粗多糖，采用DEAE-Sepharose Fast Flow色谱柱层析和Superdex-200凝胶柱进一步分离有效多糖。　　2.不同浓度的TGF-β1(0、1、2、4、8、10ng/ml)诱导结肠细胞(HT-29)48小时，通过对EMT相关标志性蛋白(E-cadherin，N-cadherin，α-SMA)的表达分析，确定最佳造模浓度。　　3.利用模型对半枝莲多糖进行筛选，并进一步分离、纯化直至均一多糖，通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)、Western blot、划痕实验、Transwell小室侵袭实验等观察活性多糖对结肠癌细胞增殖、转移和侵袭能力的影响。　　4.从Smad依赖通路与PI3K-AKT通路探讨半枝莲活性多糖抑制细胞转移、侵袭的作用机制。　　5.体内实验采用5周龄裸鼠脾脏注射结肠癌细胞(HT-29)致肝转移模型，给予低剂量组（100mg/Kg）、多糖高剂量组（200mg/Kg）半枝莲活性多糖，观察结肠癌细胞的肝转移结节数量。　　结果:　　1.当TGF-β1的浓度为10ng/ml时，E-cadherin，N-cadherin，α-SMA等EMT标志性蛋白的含量变化最大，故选定结肠癌细胞上皮间质模型的造模条件为:TGF-β1的浓度为10ng/ml，时间为48小时。　　2.经过反复筛选、分离，得到5种半枝莲多糖组分，分别是:SBPW-1、SBPW-2、SBPW-3、 SBPW-4、 SBPW-5。　　3.通过对标志性蛋白的含量变化分析，发现半枝莲SBPW-3为主要的活性多糖。并测定其分子量为10208道尔顿，初步检测SBPW-3的单糖组成为:鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成，组成比例为2.5∶25.7∶10.9∶12.6∶20.6∶27.7。　　4.CCK-8检测SBPW-3抑制结肠癌细胞增殖能力，发现当浓度在0-800mg/ml时，SBPW-3没有抑制作用;Western blot检测多糖抑制结肠癌上皮间质转化的能力，发现SBPW-3能明显抑制TGF-β1诱导引起的间质细胞标志性蛋白含量变化，同时增加上皮细胞标志性蛋白含量，且具有良好的剂量依赖性;划痕实验检测发现，当TGF-β1刺激时，结肠癌细胞的迁移能力增强，加药(SBPW-3)能明显缩短细胞迁移距离，抑制细胞迁移能力;Transwell小室检测发现，TGF-β1刺激能明显增加细胞侵袭穿过小室的数量，加药(SBPW-3)能明显减少细胞穿膜的数量，抑制细胞的侵袭能力。　　5.Western blot检测EMT相关通路蛋白发现，PI3-kinase、AKT、P-AKT均无明显变化。对Smad通路进行检测发现TGF-β1组能明显增加p-smad2、p-smad3的含量，同时SBPW-3组能明显抑制其含量变化，且具有良好的剂量依赖性。　　6.裸鼠肝转移模型显示:空白组无转移结节。对照组的8只裸鼠有7只出现转移结节（死亡1只），且结节数量较多。多糖低剂量组(100mg/Kg)的8只裸鼠中有2只出现转移结节，且结节数量较少。多糖高剂量组(200mg/Kg)无转移结节。　　结论:　　以TGF-β1(10ng/ml)可成功诱导结肠癌细胞HT-29发生EMT，该模型可用于药物的筛选。从半枝莲中分离纯化出单一多糖SBPW3，其分子量为10208道尔顿，糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖(2.5∶25.7∶10.9∶12.6∶20.6∶27.7);体外实验显示SBPW3能明显抑制结肠癌细胞的上皮间质转化进程，显著抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭能力，其可能的机制是通过抑制Smad2与Smad3的磷酸化发挥作用;体内实验表明SBPW3可抑制裸鼠脾脏注射结肠癌的肝转移发生。