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细丝蛋白A(Filamin A，FLNA)是哺乳动物细胞内一种重要的细胞骨架蛋白，由X染色体上的基因编码，可以与超过90多种蛋白结合，在转录调控、信号转导、DNA损伤修复、维持并稳定细胞骨架与细胞形态等多种生物学活动中发挥着重要作用。研究表明，细丝蛋白A发生突变将导致哺乳动物心、脑、骨、神经、胚胎等多种组织发生代谢紊乱和遗产性疾病，并且FLNA在多种癌症进程中也具有重要作用，可作为临床治疗的靶点。在本实验室的早期研究中发现，FLNA作为核仁蛋白可以抑制RNA聚合酶Ⅰ(PolⅠ)转录。随后的研究发现，在转化细胞中FLNA可以差异性地抑制RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)指导的转录，但对其具体调控机制还不完全清楚。因此，在本课题中，对FLNA抑制RNA聚合酶Ⅲ指导的基因转录机制进行了深入探究。 在以前的研究中，通过染色质免疫共沉淀分析(ChIP assay)发现，与转染Control shRNA的293T细胞系相比，293T FLNA敲低细胞系中BRF1和TFⅢC2在5S rRNA、7SL RNA和tRNA-Met基因启动子区的招募显著增加，同时促进这些基因的转录。因此，利用RT-qPCR和Western Blot对FLNA敲低细胞系和FLNA稳定表达细胞系中RNA聚合酶Ⅲ转录因子TFⅢC2和BRF1进行检测，结果表明，FLNA能够抑制TFⅢC2和BRF1的表达。接着，利用软件对BRF1和TFⅢC2启动子完成了蛋白结合位点分析，结果发现，在BRF1和TFⅢC2启动子区上游均存在SP1结合位点。并且通过对SaOS2FLNA敲低细胞系进行mRNA-seq分析，表明敲低FLNA显著增加SP1mRNA的表达。利用RT-QPCR和Western Blot方法对FLNA敲低的SaOS2、293T和HeLa细胞系进行检测，数据证明FLNA敲低确实能增加SP1的表达。因此，推测FLNA可能通过调控SP1与PolⅢ相关转录因子BRF1和TFⅢC2的结合，来抑制PolⅢ基因的表达。为此构建了FLNA-SP1双敲低HeLa稳定表达细胞系，检测发现与FLNA单敲低HeLa稳定表达细胞系相比，FLNA-SP1双敲低细胞系中BRF1、TFⅢC2的表达和PolⅢ基因转录均受到抑制。利用FLNA-SP1双敲低细胞系和FLNA敲低细胞系完成报告基因检测，结果显示，FLNA-SP1双敲低抑制BRF1和TFⅢC2启动子的活性。这些结果说明FLNA能够通过改变SP1表达水平来调节BRF1和TFⅢC2的表达以及PolⅢ基因转录。另外，在Hela FLNA敲低细胞中敲低SP1抑制细胞的增殖。这些发现不仅为FLNA抑制RNA聚合酶Ⅲ基因转录的机制提供了新的视角，也加深对肿瘤细胞增殖机理的了解。