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发光细菌双酶体外发光体系已经建立并且应用于NADH的快速检测中。本文以鳆发光杆菌YL为研究对象，通过不同的酶促反应将NADH与其特定底物相关联，建立了双酶发光体系快速检测乙醇和丙酮酸含量的方法，并探究了葡萄糖及其衍生物葡萄糖-6-磷酸含量与双酶发光体系发光强度的关系。新方法能够兼顾传统酶法检测反应条件温和、反应快速、高度专一的优点以及现场操作、快速检测的要求，为今后开发新型便携式快速检测仪器提供了理论基础。1、通过乙醇脱氢酶使乙醇还原NAD+为NADH，建立了双酶发光体系快速检测乙醇含量的方法。通过测定NADH在双酶体系中的发光强度，来确定样品中乙醇的含量。方法的线性范围为0.002mol/L-0.1mol/L，检测限为1.36×10-4mol/L。用本法测定了其他醇类如甲醇等，其发光强度很低或反应速度明显变慢，均不影响对乙醇的检测。应用本法测定了啤酒样品中的乙醇含量，并进行了加标回收实验，其重复性和精密度良好。2、通过乳酸脱氢酶使乳酸氧化NADH为NAD+，建立了双酶发光体系快速检测丙酮酸含量的方法。通过测定反应前后NADH在双酶体系中发光强度的差值，来确定样品中丙酮酸的含量。方法的线性范围为0.00014mol/L-0.001mol/L，检测限为8.537×10-5mol/L，特异性良好。应用双酶发光体系法测定了鹌鹑血清中的丙酮酸含量，并进行了加标回收实验，其灵敏度好，精密度高。3、通过己糖激酶使葡萄糖转化为葡萄糖-6-磷酸，后者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的催化作用下将NADP+还原为NADPH，通过测定NADPH在双酶体系中的发光强度，来探究葡萄糖及其衍生物葡萄糖-6-磷酸含量与发光强度的关系。与紫外分光光度计法相比，通过双酶发光体系检测葡萄糖的线性范围降低了两个数量级，而且线性关系更好。探究了葡萄糖-6-磷酸含量与双酶发光体系发光强度的关系，其检测限低至6.468×10-7mol/L。这为今后建立双酶发光体系快速检测葡萄糖及葡萄糖-6-磷酸含量的方法奠定了基础。