目的：雪旺细胞是周围神经系统特有的主要胶质细胞，在神经损伤修复中雪旺细胞起重要作用。目前神经损伤后功能的恢复均不理想，神经组织工程将会给我们带来美好的前景；由于雪旺细胞是周围神经组织工程的核心,通过体外扩增来获得大量的雪旺细胞是周围神经组织工程的基本要求，因此如何尽快获得足够数量雪旺细胞以供移植，是组织工程技术中急待解决的关键问题。我们研究NGF促进胎兔雪旺细胞的生长繁殖分裂，有很重要的实际意义。此外，由于胎儿组织尚未具有明显的生物学特性，免疫系统处于不成熟状态，对寄生环境有较强的依赖性，因此排斥反应发生不明显，容易导致“免疫宽容”，避免移植后产生免疫排斥反应；但是28天胎兔周围神经系统已经发育成熟，进行雪旺细胞培养是可行的。方法：实验前准备，包括培养用液的配制、鼠尾胶的制作、培养皿的准备。取怀孕28天的新西兰白兔，从耳静脉注入20ml空气，处死后迅速剖腹取出胎兔，胎兔经酒精浸泡处理，生理盐水冲去酒精，在手术显微镜下无菌取胎兔坐骨神经，尽量剥除神经外膜，将神经段剪成约0.1mm3组织块，用植块法培养原代雪旺细胞，第14天细胞消化传代，联合用差速贴壁法进行细胞纯化，将纯化后的细胞分成2组，再次接种培养，一组为NGF组，另一组为对照组。传代培养24小时后,每日在倒置相差显微镜下观察细胞形态，并进<WP=4>行雪旺细胞计数。以增殖指数为指标，进行统计分析。结果：胎兔神经植块在第6天见细胞从组织块周围爬出,有两种细胞，一种为细胞形态梭形,有突起,多为双极,偶尔可见3个细长突起，胞核明显,呈椭圆形。胞体周围有光晕，即生长晕。偶尔可见另一种细胞，胞体大，呈扁平状，外形不规则，突起短而多，细胞核较浅，核仁明显，有2～3个核仁。随着时间推移，细胞向植块外延展,密度逐步增加,最终与其他部位组织块周围爬出的细胞联成片。在生长旺盛的区域，细胞排列较为整齐。14天植块周围细胞长势最好。在神经外膜剥离得非常干净的情况下，雪旺细胞纯度很高，基本上为雪旺细胞，偶尔可见成纤维细胞。传代接种24小时后，在相差显微镜下进行形态学观察，实验组与对照组均有较多细胞贴壁，少量细胞悬浮死亡。细胞呈椭圆形，双极，少数细胞呈三角形。48－72小时后，细胞出现聚合现象，呈端对端、肩并肩、栅栏状排列，细胞核呈卵圆形，根据雪旺细胞特有的特征性形态以及细胞免疫组化染色证实为雪旺细胞。细胞记数：20个培养皿随机选取60个视野进行雪旺细胞记数，以增殖指数（各次细胞计数/初次细胞计数比值）的均数±标准差进行两组比较。两组均数比较的t检验结果：第3天 t值12.62，P值<0.001；第4天 t值10.29，P值<0.001；第5天 t值11.55，P值<0.001；第6天 t值24.88，P值<0.001；第7天t值36.54，P值<0.001。NGF组雪旺细胞的分裂增殖速度明显加快，统计学分析有显著的差异性。结论：周围神经损伤后，经过目前的各种方法治疗，肢体功能的恢复均不理想，神经组织工程将会解决这个问题。雪旺细胞经过多次传代培养以后形态和功能逐渐改变，不再<WP=5>适合组织工程的要求，解决问题的根本方法是培养永生化雪旺细胞系，使其分裂、增殖获得大量的细胞；Gansmmller和Penden KW的研究已取得初步成果，培养出永生化雪旺细胞系。我们采用植块法加差速贴壁联合法培养雪旺细胞，用NGF促进雪旺细胞生长分裂，获得大量的雪旺细胞，能够满足组织工程对雪旺细胞的需求，也可以避免雪旺细胞经过多次传代培养以后形态和功能改变。神经生长因子（nerve growth factor NGF）能明显地促进雪旺细胞的增殖，在短时间内获得大量的雪旺细胞,满足组织工程的需要,从而可以促进周围神经损伤的修复。