【摘 要】
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目的卵巢组织冷冻保存及自体移植是生育力保存的重要方式,而局部缺血缺氧引起的卵泡丢失是卵巢组织移植后的主要问题之一,促进血管新生是提高卵巢组织移植成功率的关键。据报道,间充质干细胞（MSCs）可促进解冻卵巢组织移植后的血管生成。然而,免疫原性效应和肿瘤发生的风险阻碍了间充质干细胞在器官移植中的临床应用。在这项研究中,我们建立了体外卵巢培养体系,并将人脐带来源的间充质干细胞（UC-MSCs）应用于解冻
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目的卵巢组织冷冻保存及自体移植是生育力保存的重要方式,而局部缺血缺氧引起的卵泡丢失是卵巢组织移植后的主要问题之一,促进血管新生是提高卵巢组织移植成功率的关键。据报道,间充质干细胞（MSCs）可促进解冻卵巢组织移植后的血管生成。然而,免疫原性效应和肿瘤发生的风险阻碍了间充质干细胞在器官移植中的临床应用。在这项研究中,我们建立了体外卵巢培养体系,并将人脐带来源的间充质干细胞（UC-MSCs）应用于解冻卵巢移植前,旨在探讨UC-MSCs在体外对冻融卵巢的血管生成作用和潜在机制,以及三维（3D）卵巢培养体系是否能够改善UC-MSCs的治疗效果。方法通过基底胶（Matrigel）建立体外3D卵巢培养体系,并通过transwell小室将UC-MSCs与解冻的小鼠卵巢共培养。所有解冻的卵巢随机分为对照组（Matrigel-/UC-MSCs-）、Matrigel组（Matrigel+/UC-MSCs-）、UC-MSCs组（Matrigel-/UCMSCs+）和UC-MSCs+Matrigel组（Matrigel+/UC-MSCs+）。使用苏木素-伊红（HE）染色检测卵泡组织学结构;使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d TUP缺口末端标记（TUNEL）染色检测细胞凋亡;使用CD31免疫组化检测新血管形成;使用实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测血管内皮生长因子A（VEGFA）、成纤维细胞生长因子1（IGF1）及血管生成素2（ANGPT2）的m RNA表达;使用蛋白免疫印迹（WB）测量GSK-3β,β-catenin和p-β-catenin（Ser552）的蛋白表达。结果与对照组及Matrigel组相比,UC-MSCs组和UC-MSCs+Matrigel组的正常形态的卵泡显著增加,并且始基卵泡和初级卵泡所占百分比显著增加（P＜0.05）。UCMSCs组和UC-MSCs+Matrigel组的微血管数目显著增加（P＜0.05）。在没有UCMSCs的情况下,3D培养体系也可以显著改善解冻卵巢的卵泡发育和微血管数量（P＜0.05）。然而,仅在UC-MSCs+Matrigel组中出现凋亡明显减少（P＜0.05）、3种血管生成相关基因VEGFA,IGF1及ANGPT2的m RNA表达均显著增加（P＜0.05）及Wnt/β-catenin通路激活。此外,随着作为Wnt/β-catenin通路抑制剂之一的IWP-2的应用,Wnt/β-catenin通路受到抑制,GSK-3β表达显著上调,而β-catenin和p-β-catenin（Ser552）的表达水平显著下调（P＜0.05）。结论UC-MSCs在3D卵巢培养体系中可以促进冻融卵巢的恢复,改善凋亡,促进血管生成。此外,我们发现UC-MSCs可以激活Wnt/β-catenin通路来调节血管生成。
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