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宁心宝胶囊为新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌虫草头孢(Cephalospovium sinensischen.Sp.nov),经液体深层发酵所得菌丝体的干燥粉末制成的胶囊。具有提高窦性心率,改善窦房结、房室传导功能,改善心脏功能的作用。用于多种心律失常,房室传导阻滞,难治性缓慢型心律失常传导阻滞。现行标准规定了甾体化合物和氨基酸两项定性鉴别,并以每粒含氮(N)量作为定量指标。随着大量虫草菌丝体发酵产品被开发,人工虫草产品中化学成分的整体含量和水平接近于虫草子实体。到目前为止,对宁心宝胶囊的报道多集中在药理方面,有关其化学成分的分析报道较少。为了准确反映产品的内在质量,有必要对宁心宝胶囊的化学组成进行研究。本文从3类化学成分入手,对不同厂家的宁心宝胶囊样品进行了质量评价方法研究。
对4个不同厂家宁心宝胶囊中的水解氨基酸包括门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸进行了含量测定。采用柱前衍生异硫氰酸苯酯法测定其中水解氨基酸的含量,色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mmi.D.,5μm),流动相为A:0.1mol/L乙酸钠-乙腈(97:3,v/v),B:乙腈-水(4:1,v/v),梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长254nm,在40min内,测定其中水解氨基酸的组成与含量。16种氨基酸线性范围分别为0.016~0.201mgml/L(r=0.9974),0.016~0.200mgml/L(r=0.9985),0.016~0.201mgml/L(r=0.9993),0.016~0.202mgml/L(r=0.9999),0.016~0.199mgml/L(r=0.9996),0.016~0.201mgml/L(r=0.9995),0.016~0.202mgml/L(r=0.9994),0.016~0.199mgml/L(r=0.9997),0.016~0.198mgml/L(r=0.9999),0.016~0.200mgml/L(r=0.9999),0.016~0.201mgml/L(r=0.9998),0.017~0.201mgml/L(r=0.9998),0.016~0.202mgml/L(r=0.9999),0.016~0.199mgml/L(r=0.9999),0.016~0.202mgml/L(r=0.9999),0.016~0.160mgml/L(r=0.9992);回收率为91.5%~102.8%;RSD为0.7%~3.1%(n=6)。
建立了高效液相色谱法测定宁心宝胶囊中核苷类成分的含量。色谱柱为AgilentTC-C18(250mm×4.6mmi.D.,5μm);以磷酸盐缓冲液(pH7.8~8.0)-乙腈(83:17)为流动相,流速为1.0mL/min;检测波长为260nm。宁心宝胶囊中主要成分尿苷、腺苷和次黄嘌呤核苷分别在4.168~83.36μgml/L(r=0.9999),4.480~89.60μgml/L(r=0.9999)和5.230~104.6μgml/L(r=0.9999)范围内有良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.6%,102.1%和111.7%,RSD分别为0.4%,1.8%和2.5%。
建立了宁心宝胶囊多糖组分的相对分子质量和相对分子质量分布测定方法。以ShodexSB-803HQ,SB-804HQ和SB-805HQ(8.0mm×300mm,5μm)3根凝胶色谱柱串联分离,以磷酸盐缓冲液(pH7.8~8.0)为流动相,流速为0.8mL/min,柱温和检测器温度均为30℃,示差检测,进样量20μL,GPC软件分析。宁心宝胶囊中所占比例最大的多糖组分重均相对分子质量为28749~129690,多分散性为1.12~3.73。
本研究建立了中成药宁心宝胶囊的质量评价方法,为科学评价中成药的质量作出了有意义的探索。