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实验目的:通过逆向蒸发法制备四种阳离子质体,体外转染筛选高效低毒的阳离子脂质体,优化转染条件,雾化介导CpGODN入哮喘小鼠模型,探讨哮喘基因治疗方法。 实验方法:(1)阳离子脂质体的制备及体外转染筛选:利用Sigma公司的多聚胺胆固醇阳离子脂质TC-Chol,DC-Chol与中性磷脂DOPE按照不同的摩尔比,采用逆向蒸发法制备出多聚胺胆固醇阳离子脂质体(Polyamine-Chol cationic liposome),简称多聚胺阳离子脂质体(Polyamine cationic liposome,PCL),透射电镜检测其形态,转染携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的质粒PIRES2-EGFP进入哺乳动物细胞,通过荧光显微镜检测EGFP的表达,批评价阳离子脂质体的转染效率,通过MTT法检测转染后不同时间细胞存活分数评估细胞毒性,从而筛选相对高效低毒的PCL并优化PCL转染哺乳动物条件。 (2)PCL雾化介导CpODN治疗哮喘方法探讨:①哮喘模型制备