本研究通过克隆Apr-3的编码区基因，对其进行细胞定位，并获得了Apr-3原核表达蛋白和抗体，主要研究工作如下： 1.培养HL-60细胞，提取HL-60细胞总RNA，应用RT-PCR获取Apr-3的转录剪接体2的编码区cDNA序列，将该cDNA与质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B连接，构建克隆载体，将其转化E.coliDH5α，进行测序。 2.测序正确后将该cDNA与质粒pEGFP-C3连接，并将其转染COS-7细胞。荧光显微镜蓝色激发光下观察绿色荧光蛋白表达的部位。 3.培养HL-60细胞，提取HL-60细胞总RNA，应用RT-PCR获取Apr-3转录剪接体2编码区cDNA序列的前366bp，将该cDNA与质粒pcDNA3.0连接，构建克隆载体，将其转化E.coliDH5α，进行测序。 4.测序正确后将该cDNA与质粒pET28a连接，构建原核表达载体，转化大肠杆菌，诱导表达获得Apr-3蛋白。并用Ni柱对获得蛋白进行纯化。 5.用获得的融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔多克隆抗体，用ELISA法检测抗体滴度，用WesternBlot检测Apr-3融合蛋白免疫学活性。 研究结果：对测序结果进行序列分析，与GenBank中登录的Apr-3编码区完全一致。pEGFP-Apr-3基因表达产物定位于COS-7细胞的细胞膜和细胞质。应用RT-PCR获取Apr-3编码区cDNA序列的前366bp，将该cDNA与质粒pcDNA3.0连接，构建克隆载体，将其转化E.coliDH5α，进行测序，与GenBank中登录序列比对，其结果正确后将该cDNA与质粒pET28a连接，构建原核表达载体，转化大肠杆菌，诱导表达获得Apr-3蛋白。Apr-3融合蛋白主要以包涵体形式存在。获得兔多克隆抗体，ELISA法检测抗体效价为：1∶4000。用WesternBlot检测Apr-3融合蛋白免疫学活性，显示原核表达的蛋白可与多克隆抗体特异结合。 研究结论：对Apr-3基因的一个转录剪接体进行克隆，构建了真核表达载体，首次发现Apr-3的该转录剪接体主要在真核细胞的细胞膜和细胞质表达。成功构建了Apr-3的原核表达载体，获得了较纯的Apr-3融合蛋白。并获得了Apr-3蛋白的兔多克隆抗体。为后期对该基因的结构和功能的研究奠定基础。