大鼠脊髓挫伤后大脑皮层、脊髓和骨骼肌中GAP-43的表达变化

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[目的]:调查大鼠脊髓挫伤后损伤位点及其相联系的大脑皮层和骨骼肌中GAP-43的含量变化,探讨GAP-43在脊髓损伤修复中的作用及其与脊髓可塑性的关系。[方法]:成年SD雌性大鼠30只,随机分成5组:正常组、T8-T10脊髓挫伤3d、7d、14d和21d组,每组6只。其中,各组中2只用于免疫组化以了解GAP-43的原位分布,4只用于Western Blot检测GAP-43的含量。各组大鼠在存活期间均行后肢BBB运动功能评分。用于免疫组化的大鼠腹腔麻醉后,4%多聚甲醛经升主动脉灌注后取材,包括大脑皮层、T8-T10脊髓和后肢腓肠肌。行组织固定后制作5μm石蜡切片。间隔取片以GAP-43抗体行免疫组化染色,光镜下观察阳性产物分布情况。(行阳性细胞计数,统计学分析,并照片)。用于western blot的大鼠麻醉后,于活体下快速打开腿部皮肤、椎管和颅腔,取材部位同上。冲洗后冰浴下匀浆,将提取的蛋白离心、分装。电泳及免疫印迹检测后,利用凝胶成像系统分析各杂交带的光密度值。采用单因素的方差分析法进行统计学分析。[结果]:1、正常组及脊髓挫伤组大鼠大脑皮层神经元、脊髓腹角少量神经元,及腓肠肌细胞内均可观察到GAP-43阳性反应物(免疫阳性细胞胞浆呈棕黄色,胞核呈空泡状)。2、在大脑皮层中,大鼠脊髓挫伤后GAP-43含量均较正常组升高(P<0.05)。3、在脊髓中,大鼠脊髓挫伤后,GAP-43表达即开始增加(P<0.05),并有持续升高趋势。挫伤后3天,GAP-43表达明显增强(P<0.05),阳性细胞增多;至14天,GAP-43表达量达高峰。4、在腓肠肌中,大鼠脊髓挫伤后,GAP-43的表达从3天开始逐渐增加(P<0.05),并呈现持续的升高趋势;21天GAP-43的表达量达到最高峰。5、BBB运动功评分:正常组为21分,3天时呈软瘫状态(3分),从7d(9分)起逐步恢复,14d为13分,21d时接近正常为19分。[结论]:1、各组大鼠大脑皮层、脊髓和骨骼肌中均有GAP-43表达,提示GAP-43参与了正常和损伤后神经元的生理活动。2、大鼠脊髓挫伤后,GAP-43的含量在大脑皮层和脊髓14天以前逐步升高并于14天达高峰,而在骨骼肌中则持续上升,21天达高峰。说明脊髓挫伤后GAP-43在各部位的表达变化大致相同。脊髓损伤早期GAP-43均有升高的趋势。3、脊髓挫伤后,大鼠下肢运动功能的恢复与大脑皮层、脊髓中GAP-43含量变化的趋势较一致,特别是与骨骼肌中GAP-43的含量变化一致。提示GAP-43的含量变化可能与脊髓挫伤后的可塑性有关。为临床应用GAP-43治疗脊髓损伤提供实验依据。
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