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目的:外阴癌(Vulvar carcinoma)较罕见，占女性全身恶性肿瘤的1％，占女性生殖系统恶性肿瘤6％-8％。其中外阴鳞状细胞癌（vulvar squamous cell carcinoma，VSCC，简称外阴鳞癌）是最常见的病理类型，占80-90％，总体5年存活率为58.9-68.9％，晚期患者五年生存率不超过20％。研究结果表明，外阴鳞癌的发生主要与人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus，HPV）感染有关，与外阴硬化性苔藓、外阴上皮内瘤变及P53突变也具有一定相关性。另外，人类免疫缺陷病毒(Human ImmunodeficiencyViruses，HIV)、单纯疱疹病毒Ⅱ（Herpes Simplex VirusⅡ，HSV-Ⅱ）也是外阴鳞癌发生的风险因素。但外阴鳞癌的确切发生发展机制尚不清楚。 肿瘤遗传学与分子生物学相关的研究表明癌基因过度表达或抑癌基因表达缺失与突变等是细胞发生癌变的重要分子基础。从此角度探讨外阴鳞癌可能的发病机制有望为临床上有效诊断和治疗外阴鳞癌甚至阻断外阴鳞癌的发生提供新思路。 近年来，非编码RNA(non-coding RNA，ncRNA)与肿瘤的关系引起了广泛关注，ncRNA中约76％属长链非编码RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)，是目前研究的又一大热点。HOTAIR(HOX transcript antisense intergenic RNA)是首个被发现具有反式转录调控作用的lncRNA，随后被发现在多种恶性肿瘤中存在差异表达，并影响肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、代谢等生物学行为及对放化疗的敏感性。HOTAIR可通过影响肿瘤细胞的EMT(epithelial-mesenchymal transition，上皮间质转化)过程及MMPs(Matrix Metalloproteinases，基质金属蛋白酶)介导肿瘤浸润转移，有望成为辅助诊断肿瘤的分子学标志物及有效治疗肿瘤的关键靶点。但HOTAIR的这种调控功能是否在所有肿瘤细胞中都起作用尚不清楚。本研究在国内外相关研究的基础上，选取人外阴鳞癌细胞系A431为研究对象，利用RNA干扰技术降低外阴鳞癌A431细胞中LncRNA HOTAIR的水平，探讨LncRNA HOTAIR对A431细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及部分可能的机制，推测其在外阴鳞癌发展中的作用，为外阴鳞癌的基因治疗提供一定的理论基础和试验依据。 研究方法:采用qRT-PCR方法比较外阴鳞癌细胞A431及正常细胞Hacat中LncRNA HOTAIR的表达情况，通过脂质体介导的瞬时转染法将HOTAIR的小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)序列转染到A431细胞，以降低细胞内LncRNAHOTAIR水平，同时设立空白对照A431组（只有转染试剂）与阴性对照A431-NC组（转染阴性对照siRNA），运用qRT-PCR方法检测三组细胞中LncRNA HOTAIR的水平检测转染效率。采用CCK-8法检测A431细胞增殖水平;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法的流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell迁移、侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western-Blot技术检测侵袭相关因子MMP-9蛋白水平的表达;最后利用统计学方法分析转染前后的结果。 结果:1、qRT-PCR结果显示，LncRNA HOTAIR在外阴鳞癌细胞A431中的表达为正常细胞Hacat的3.69±0.29倍，显著高于Hacat细胞(p=0.004);2、HOTAIRsiRNA转染细胞48h后，qRT-PCR结果显示，A431-siHOTAIR组细胞相对于空白对照A431组细胞HOTAIR的表达量为0.34±0.02，明显低于A431组及A431-NC组(p＜0.001，p＜0.001);3、CCK-8法检测结果显示，转染HOTAIR siRNA后，在24h时A431-siHOTAIR组、A431-NC组、A431组细胞株增殖情况组间比较无明显差异(p＞0.05)，在48h和72h时A431-siHOTAIR组相比A431-NC组、A431组，细胞增殖差异均有统计学意义。A431-siHOTAIR组在48h和72h相比A431组，细胞增殖均显著减少(p=0.019，p=0.016); A431-siHOTAIR组在48h和72h相比A431-NC组，细胞增殖均显著减少(p=0.013，p=0.009); A431-NC组与A431组比较无显著差异(p＞0.05);4、流式细胞术检测结果显示，转染HOTAIR siRNA后48h时，A431-siHOTAIR组、A431-NC组、A431组细胞的早期凋亡率分别为(5.50±1.28)％、(3.77±0.90)％、(3.05±0.27)％，与A431-NC组、A431组相比A431-siHOTAIR组的细胞凋亡率增加有统计学意义(p=0.012，p=0.020)，两对照组间比较无统计学意义(p＞0.05);5、Transwell迁移实验结果显示，转染HOTAIR siRNA24h后，A431-siHOTAIR组穿膜细胞数为9.58±0.10，明显少于A431-NC组及A431组(分别为22.58±2.02、22.92±2.47;p＜0.001、p＜0.001)，A431-NC组与A431组穿膜细胞数相比无显著差异;6、Transwell侵袭实验结果显示，转染HOTAIR siRNA24h后，A431-siHOTAIR组穿膜细胞数为11.5±0.67，明显少于A431-NC组及A431组(分别为31.17±2.62、31.5±2.75; p＜0.001、p＜0.001)，A431-NC组与A431组穿膜细胞数相比无显著差异。7、Western-Blot结果显示，转染HOTAIR siRNA48h后，A431-siHOATIR组细胞MMP-9蛋白表达较A431-NC组下调，有显著性差异(p=0.032)。 结论:1、外阴鳞癌A431细胞的LncRNA HOTAIR表达水平高于正常对照Hacat细胞。2、干扰LncRNA HOTAIR的表达可有效抑制A431细胞的增殖、迁移及侵袭能力。3、HOTAIR siRNA可显著下调A431细胞中的MMP-9蛋白的表达水平。