【摘 要】
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是一种凋亡诱导因子,它是继TNF、FasL之后发现的又一个TNF家族成员,又称凋
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是一种凋亡诱导因子,它是继TNF、FasL之后发现的又一个TNF家族成员,又称凋亡素-2配体(apoptosis-2ligand,Apo2L).人源的TRAIL是一种Ⅱ型单跨膜蛋白,在机体各组织中均呈现组成性表达,可特异性诱导诱导多种肿瘤细胞的凋亡,而对大多数正常细胞无杀伤作用.TRAIL<,114~281>的胞外部分,即可溶性TRAIL(soluble TRAIL,sTRAIL)与全长的TRAIL具有相同强度的诱导肿瘤细胞凋亡的作用.本研究的主要工作是:利用甲醇营养型酵母(Pichia pastoris)分泌表达人sTRAIL/TRAIL<,114~281>分子.具体来讲,即:用PCR方法扩增出sTRAIL的cDNA序列,将其插入到穿梭质粒pPIC9K的MF α信号肽序列后、醇氧化脱氢酶1(AOX1)启动子的下游,得到重组质粒pPIC9K-sTRAIL.经Sal I酶切线性化后,用聚乙二醇(PEG)1 000法将其转化到毕赤酵母宿主菌GS115,经筛选得到sTRAIL分泌表达菌株,SDS-PAGE及Western-blotting确认表达,L929细胞测定表达产物的活性.实验结果如下:毕赤酵母分泌表达的sTRAIL,SDS-PAGE分析占总蛋白的20%.用抗人sTRAIL单抗可以确认表达了sTRAIL重组分子,L929细胞检测表明,表达产物可诱导肿瘤细胞凋亡,说明sTRAIL可能已正确折叠并形成行使生物学功能所必须的活性中心.以上结果表明:毕赤酵母表达系统可正确分泌表达人可溶性TRAIL分子,为研究其作用机制及进一步医用开发创造了条件.
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