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本文对目前Genbank报道的多形汉逊酵母所有基因的编码序列进行了统计分析,建立了汉逊酵母高表达基因的密码子用法,成功地构建了一整套完整的汉逊酵母整合型表达载体,可以直接用于外源基因的表达。
本文根据多形汉逊酵母高表达基因的密码子用法表,人工合成了口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1上的主要抗原表位(第21-40、135-160和200-213位氨基酸)和带有6×His-tag标记的霍乱毒素B亚单位的融合蛋白(VP1-hCTB)对应的DNA序列。
本文利用已构建的重组Hansenulapolymorpha表达口蹄疫复合表位和霍乱毒素B亚单位的融合蛋白VP1-hCTB作为粘膜疫苗,采用腹腔注射、鼻饲、口服三种不同的粘膜免疫途径免疫小鼠,通过ELISA检测抗体水平、细胞因子水平和保护率对免疫学效力进行评估。结果表明,VP1-hCTB的腹腔和鼻饲免疫效果优于口服免疫。腹腔免疫猪3次后用105SMLD50强毒攻击,保护率达80﹪。
本研究首次提出并证实了通过新型粘膜免疫疫苗预防口蹄疫的可行性。