小鼠精原干细胞培养体系的优化及体外基因转移

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系统评述了精原干细胞(SSCs)研究目前的进展,进一步优化了小鼠SSCs 的培养体系,探讨了其体外转基因的方法和条件。结果表明,盘化法结合差速贴壁法比Percoll 法更适于SSCs 富集;培养液中添加表皮生长因子及雌二醇-17β对SSCs 的体外培养有良好作用。创造性地建立了稳定表达小鼠胶质细胞源神经营养因子(GDNF)的转基因STO 细胞饲养层STOGDNF,并证明其对SSCs 的体外培养有显著效果。成功构建了携带人组织纤溶酶原激活剂基因t-PA 的逆转录病毒载体PLNC-tPA、PL-tPA-SN 并获得了稳定产毒的PA317 包装细胞;以优化的培养体系为基础,用PLNC-tPA、PL-tPA-SN及真核表达载体pcDNA3-tPA以3种方式对SSCs进行体外转染,移植后初步分析认为,将SSCs 培养于STOGDNF 饲养层上,用脂质体—pcDNA3-tPA 转染或用产毒PA317 的培养上清一次性感染,均适于将外源基因导入SSCs 基因组。
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