【摘 要】
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目的:研究E1A结合蛋白P300（E1A Binding Protein P300,EP300）在食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的功能并初步探讨其作用机制。方法:1.整合分析中国四个队列共425例ESCC患者中35个组蛋白修饰基因突变情况;2.采用组织芯片及免疫组化技术检验EP300在ESCC中的蛋白表达水平并通过秩和检验、Log
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目的:研究E1A结合蛋白P300（E1A Binding Protein P300,EP300）在食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的功能并初步探讨其作用机制。方法:1.整合分析中国四个队列共425例ESCC患者中35个组蛋白修饰基因突变情况;2.采用组织芯片及免疫组化技术检验EP300在ESCC中的蛋白表达水平并通过秩和检验、Log-rank检验、Cox回归等分析其表达水平与各项临床参数间的关系;3.采用实时定量PCR（Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹技术（Western blot）检测EP300在不同ESCC细胞系中的表达水平,筛选出内源性表达较高的两种细胞系,通过慢病毒转染方式在内源性表达较高的细胞系中对EP300进行敲低;4.采用MTT、Transwell、克隆形成和细胞划痕等技术检测EP300在ESCC细胞系中的功能表型;5.对EP300敲低细胞进行转录组测序,筛选出敲低EP300后的显著差异基因,进行功能和通路的富集分析;6.采用RT-qPCR技术检测上皮间质转化、血管生成和缺氧通路的分子标志物,验证EP300在ESCC细胞系中对这三种表型的调节作用。结果:1.筛选出一系列在ESCC中反复出现突变的组蛋白修饰基因。其中EP300突变率为10.8%,为ESCC中显著突变基因。EP300突变的ESCC患者预后显著差于野生型患者（p=0.026）;2.EP300在癌组织中表达水平显著高于配对的癌旁正常组织;EP300高表达ESCC患者预后显著差于低表达患者（p=0.048）;3.在进行检测的九种ESCC细胞系中,KYSE140和KYSE180两种细胞系的EP300内源性表达相对较高;4.EP300敲低后显著抑制了ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭;5.根据测序结果,EP300敲低后显著差异基因主要分布在上皮间质转化,血管生成及缺氧通路相关的信号通路;6.EP300敲低后抑制ESCC细胞的上皮间质转化、血管生成拟态和缺氧代谢表型和相关基因的表达。结论:EP300可能通过促进ESCC的上皮间质转化、血管生成和缺氧代谢发挥对ESCC的促癌作用。
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