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硫代葡萄糖苷是次生代谢产物,主要存在于双子叶被子植物中。硫代葡萄糖苷可作为抗微生物制剂、杀虫剂和天然熏蒸消毒剂,异硫氰酸酯是其多种降解产物中的一种。异硫氰酸酯除具有强烈的辛辣气味可作为调味品外,还具有抗病毒、抑菌和抗癌活性,能够有效的防止饮食中如杂环胺、多环芳烃和亚硝胺等多种致癌物所引起的DNA损伤和癌症。因此,硫甙的研究吸引了众多食品化学、医药和生物学家的兴趣。本文则主要对硫代葡萄糖苷glucoraphanin的生物降解及其降解产物莱菔硫烷的稳定性及中药莱菔子中glucoraphenin的生物转化工艺进行研究。
首先对本实验室32株菌株对硫代葡萄糖苷glucoraphanin和glucoraphenin的生物转化能力进行筛选。结果表明,共有25种菌株对glucoraphanin具有降解能力,其中链格孢、柱孢对glucoraphanin的降解能力比较强4种菌株对glucoraphenin具有还原能力,其中束梗头孢对glucoraphanin的降解能力比较强。
其次,采用单因素实验法通过动态研究,每60mL菌丝悬浮液中加入20mg/L底物,在25℃、160rpm的条件下转化96小时为最佳条件,培养基中的葡萄糖浓度控制在1%。另外,通过对静息细胞培养对glucoraphanin降解条件的研究表明,该反应的最适pH在6.5-7.5之间。
采用单因素实验法对可能影响glucoraphenin转化率的因素进行研究,确定转化的最佳时间为给药后96小时,pH6-8,加药量为40μg/mL。采用液相色谱、紫外扫描、液质连用技术对转化产物进行初步鉴定,从鉴定结果分析,转化产物为目标产物glucoraphanin。
另外本文利用自制的高纯度莱菔硫烷,采用HPLC测定莱菔硫烷的含量,考察了不同温度、光照、空气中的氧气和不同的包装材料对莱菔硫烷油状原液稳定性的影响,以确定其最适保存条件。实验表明高温加热时间较长莱菔硫烷含量会出现明显降低,降解产物含量增加。莱菔硫烷对热不稳定,随温度升高或加热时间的延长会逐渐分解。对光线的稳定性好。空气中的氧气可加速莱菔硫烷的降解,包装材料对莱菔硫烷的稳定性影响不大。