论文部分内容阅读
目的:1.探讨miR-144在复发性自然流产与正常早期妊娠绒毛组织中的表达差异。2.在人滋养细胞HTR-8中探讨miR-144对其可能的靶基因STAT1的调控作用。3.了解miR-144对人滋养细胞HTR-8凋亡的影响,以探讨miR-144在复发性自然流产发病过程中的作用。方法:1.采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测miR-144在15例正常早期妊娠和15例复发性自然流产患者绒毛组织中的表达。2.采用瞬时转染技术在人正常滋养细胞系HTR-8细胞中分别转染miR-144mimics与miR-144inhibitor,即过表达与抑制miR-144的表达后,RT-PCR技术检测HTR-8细胞中miR-144及STAT1mRNA的表达水平,并采用Western-blot技术检测Statl蛋白的表达水平。3.在HTR-8细胞中过表达与抑制miR-144的表达后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:1.实时荧光定量PCR结果显示,复发性自然流产患者绒毛组织中miR-144的表达低于对照组(P<0.001)。2.在人滋养细胞系HTR-8细胞中过表达与抑制miR-144的表达后,RT-PCR技术检测miR-144及STAT1mRNA的表达量,结果显示与对照组相比,过表达组miR-144的表达量升高,而STAT1mRNA的表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.001);抑制组miR-144的表达量降低,而STAT1mRNA的表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.001); Western-blot技术检测STAT1蛋白的表达水平,结果显示与对照组相比,过表达组Statl蛋白的表达量降低,抑制组STAT1蛋白的表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。提示STAT1在mRNA和蛋白水平的表达受到miR-144的负调控。3.在HTR-8细胞中过表达与抑制miR-144的表达后,流式细胞术检测细胞凋亡指数,结果显示,上调miR-144的表达后细胞凋亡率较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而下调miR-144的表达后细胞凋亡率较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:1.复发性自然流产患者绒毛组织中miR-144的表达降低,提示miR-144可能参与了复发性自然流产的发生。2.STAT1是miR-144的一个作用靶点,且在mRNA和蛋白水平,miR-144均对STAT1有着明显的负性调控作用。3.miR-144可以抑制滋养细胞的凋亡,提示miR-144的低表达可能通过增加滋养细胞的凋亡而参与了复发性自然流产的发病过程。