深静脉血栓形成(Deep venous thrombosis，DVT)是一种常见的静脉疾病，尽管住院患者的预防DVT 的措施正在不断加强，DVT目前仍然是临床医疗工作中面临地一个严重的难题。虽然肺动脉栓塞可以造成猝死，但疾病后期并发下肢慢性静脉机能不全(CVI)引起地肢体肿胀、疼痛、溃疡形成等症状却更加普遍，因此针对并发症的治疗，也是十分必要地。髂股静脉内大量血栓的患者，病后3-8年的时间内，30-67％的患者出现严重的CVI症状，而且未彻底治愈的DVT并发DVI的患者产生的临床症状，要比单纯的静脉瓣膜功能不全导致的倒流性疾病的症状更加严重。现在的治疗只能防止血栓蔓延，但我们必须进一步解决血栓的分解吸收、血管再通、血液正常回流，才能彻底治愈DVT。 随着近年来对于细胞的研究进展，为干细胞用于治疗深静脉血栓形成提供了新机遇。本研究将兔骨髓间充质干细胞体外分离、纯化后，移植到兔股静脉血栓后肢的血栓周围肌肉组织中，发现骨髓来源的MSCs可分化增殖为成熟的血管内皮细胞，促进血栓周围组织内新生血管形成，同时机化血栓内部的单核—巨噬细胞，嗜中性粒细胞的数量均显著增加，促进血栓的消融。全文分为两个部分： 第一部分: 实验动物兔深静脉血栓模型的制备。 目的：采用股静脉钳夹结扎+注射凝血酶的方法，建立兔的深静脉血栓模型，为下一步行rMSCs移植奠定基础。 方法：于新西兰大白兔右侧后肢大腿的股内侧游离一段股静脉，阻断血流60min；缝扎所有分支，用无齿镊夹取股静脉壁10余次造成机械损伤，然后，于远心端股静脉分支内注入凝血酶。见到静脉腔内已有暗红色血凝块形成后，缝扎股静脉近心端，开放股静脉远端血流。所有动物术后第5—7天行右下肢静脉造影，分别在手术后第14、21天。处死动物，进行大体标本及病理检查。 结果：24只兔均成功建立右侧股静脉血栓模型，21天内24只兔均存活，一般情况良好，未出现严重并发症，术后无一例死亡。右下肢静脉顺行造影，未见股静脉显影，造影剂经大腿内侧的浅静脉回流至髂总静脉。病理证实股静脉有血栓形成，血栓内大量炎性细胞浸润，大部分血栓纤维化，血管部分再通。 结论：股静脉钳夹结扎+注射凝血酶的方法造栓的动物模型，根据血液高凝、血流滞缓、静脉壁损伤这三种主要致病因素，形成的血栓能够在血管内保留相对长的时间，因而形成的机化血栓更可用于DVT 慢性期的实验研究。 第二部分： 兔深静脉血栓模型自体骨髓干细胞移植的实验研究 目的：采集、分离纯化兔骨髓间充质干细胞(rMSCs)，BrdU标记后，自体移植观察治疗深静脉血栓的疗效。 方法：实验分组：A组，实验组，DVT+右后肢局部注射移植；B组，对照组1，DVT+右后肢局部注射生理盐水；C组，对照组2，正常左后肢假手术+左后肢局部注射移植。抽取兔髂后上棘、髂前上棘骨髓，密度梯度离心，淋巴细胞分离液ficoll分离骨髓，溴脱氧尿嘧啶(5—brom-2—deoxyuri—dine，BrdU)与rMSCs共同培养，注射于A组兔股静脉血栓周围的肌肉组织中，C组兔正常的肌肉组织中，注射生理盐水于B组兔股静脉血栓周围的肌肉组织中。分别于移植后第7天、第14天处死兔，取肌肉组织行CD31、BrdU免疫组化染色，并计数兔肌肉组织中CD31染色阳性的微血管数量(microvessel density MVD)，取血栓形成节段的股静脉，HE染色，计数血栓组织中的炎症细胞数。 结果：兔骨髓间充质干细胞分离纯化、BrdU标记后，记数单个核细胞数量6.21±0.56×106/ml。移植后A、B、C三组兔后肢肌肉组织切片中均可见CD31染色阳性的微血管；A、C两组兔后肢肌肉组织切片中均可见到BrdU染色阳性细胞，BrdU染色可证明骨髓来源；而B组中BrdU染色为阴性。单因素方差分析(One—Way ANOVA，LSD法)显示：A、B、C三组的每两组之间，在移植后第7天与移植后第14天比较，组间微血管密度均有显著性差别；A、B两组血栓组织中的单核—巨噬细胞，嗜中性粒细胞的数量均显著增加。 结论：密度梯度离心法能有效分离纯化骨髓MSCs。自体骨髓移植后，兔股静脉血栓模型的肌肉组织内，骨髓来源的MSCs可分化增殖为成熟的血管内皮细胞，促进血栓周围组织内新生血管形成；血栓组织中炎症细胞的数量明显增加，促进血栓的消融。