Bacillus mojavensis strain W-1拮抗黄曲霉活性物质的稳定性研究

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黄曲霉(Aspergillus flavus,AF)具有极强的感染能力,尤其是对花生、玉米和黄豆等造成的强度大,范围广的污染。农作物在生长期,收获期,储藏期以及加工成为食品的过程中,都存在被黄曲霉污染的可能性。黄曲霉毒素的强毒性,强致癌性以及造成的高强度,广范围的污染,使得对黄曲霉防治法的研究越来越急切。经过前人们不间断的研究,发现用生物防治法来防治有害物或有害菌是一种既环保又有效并具有无限潜力的方法。Bacillus mojavensis strain W-1是实验室从长期被黄曲霉污染的土壤中分离筛选得到的一株细菌,它能够产生抑制黄曲霉毒性的活性物质。本课题主要对Bacillus mojavensis strain W-1产生的抑黄曲霉活性物质的性质进行研究和探讨。主要的研究思路与结论为:(1)调查了曲阜郊区农田中黄曲霉状况,结果发现,夏季条件下的中黄曲霉的数量最多,春秋季次之,冬季数量最少,并且,种植花生的土壤比种植玉米的土壤含有的黄曲霉数量要多。但是,在不同季节,不同土壤中虽然有差异,但对比数据后可以确定,农田土壤中的黄曲霉菌量确实很大,也就是说黄曲霉污染农田现象严重。(2)测定了Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质的具有最强抑菌活性时的培养时间,紧接着对Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质的稳定性进行了实验:分别做了热稳定性实验,pH稳定性实验,紫外稳定性实验,光照稳定性实验和遗传稳定性实验这五个性质实验。实验发现:Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质的最适宜培养时间为培养至48小时;Bacillus mojavensis strain W-1产生的抑菌活性物质对温度不敏感,从28℃到121℃处理的结果显示,高温对该物质的活性基本不存在影响;Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质在强弱酸碱环境中都可以保持有较高的抑菌活性;紫外稳定实验发现,不同时长和不同剂量的紫外照射对Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质的抑菌活性基本不产生影响;光辐射实验的结果说明,光照对Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质也不会产生影响,也就是说Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质在不同时长的光照下,抑菌活性都保持在较高水平。Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质的遗传性十分稳定,连续传代8代后,其抑菌活性基本没有改变。通过这些性质可以初步推断,Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质为脂肪态类物质。(3)在实验室条件下,粗略测定出了Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质抑制黄曲霉的最低抑菌浓度为125μg/mL。然后,进一步探究了Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质对花生,玉米这些容易受到黄曲霉侵染的农作物的防治作用,经过对比实验,实际验证了W-1产抑菌活性物质确实对受到黄曲霉侵害的作物具有不错的防治效果。(4)对抑菌活性物质从分子水平进行了初步分析。采取PCR扩增技术,对产抑菌活性物质的编码基因进行扩增,然后经琼脂糖凝胶电泳分析后,在基因数据库中,对比出Bacillus mojavensis strain W-1中含有三个编码抑菌活性物质的基因,分别为:albF,bac D和sfP。这三个基因所编码的抑菌活性物质按顺序分别为:bacilysin,surfactin和subtilosin,这三种物质均有抑菌、溶菌的作用。这从基因层面初步推断出Bacillus mojavensis strain W-1产抑菌活性物质中的抑黄曲霉毒素的有效成分,也更确定了Bacillus mojavensis strain W-1是具有抑菌活性。
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