背景：嗜酸性主要碱性蛋白前体(Profom of eosinophil major basic protein，ProMBP)是嗜酸性粒细胞特殊颗粒中含量最丰富的蛋白质，即主要碱性蛋白(Major basic protein，MBP)的前体，其主要在嗜酸性粒细胞的前体细胞中表达；此外，胎盘的X细胞也可以合成ProMBP并分泌到母体血液循环中[1].ProMBP是一种高度糖基化的蛋白质，由206个氨基酸残基组成，等电点为6.0[2]，分子量50～90 ku，因其高度糖基化，SDS-PAGE后，行考马斯亮蓝染色几乎不可见[3]。ProMBP在母体血液循环中与三种重要的生物活性分子结合以复合物的形式存在[4]：与PAPP-A以二硫键结合，形成2:2异源四聚体，分子量500 ku；与血管紧张素原以二硫键结合，形成2:2异源四聚体，分子200 ku；与血管紧张素原和补体C3dg以二硫键结合，形成2:2:2异源六聚体，分子量280 ku。有报道认为ProMBP可以作为筛查唐氏综合征(Down Syndrome，Ds)的一项有效的血清学指标[5-7].妊娠早期，其水平是逐渐升高的，妊娠中期达峰值[3]，另外，正常非孕妇女血清中也可检测到ProMBP[3]。目前，国外检测ProMBP的主要方法是ELISA测定[6]以及免疫放射测定[8]，但国内尚没有这方面的报道。 目的：纯化、鉴定和标记抗ProMBP单克隆抗体(mAb)以及建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法。 方法：采用Protein A亲和层析法纯化本室制备的抗ProMBP mAb，并行SDS-PAGE和Western-blotting对纯化抗体特性进行鉴定；利用简易过碘酸钠法对抗ProMBP mAb进行标记HRP后行抗体配对实验；通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度；以纯化的PAPP-A/ProMBP抗原为标准品建立标准曲线；以重复性、灵敏性、回收性实验和交叉反应评价ELISA方法。初步对人血清中的ProMBP水平进行检测。 结果：最佳配对组合为抗ProMBP mAb 4C6E5B9和HRP标记的抗ProMBP mAb 9G4A6G10，最适工作浓度分别为2.5μg/ml和1:3000，该方法的批内、批间变异系数分别为4.6％～6.2％和4.6％～10.5％，灵敏度达2.0 ng/ml，回收率为92％～113％，与所测蛋白无交叉反应。正常非妊娠血清、9～11周妊娠血清、15～17周妊娠血清ProMBP水平分别为(26.37±2.90)ng/ml、(357.71±33.60)ng/ml和(1088.77±58.13)ng/ml。 结论：纯化、鉴定和标记了抗ProMBP mAb；初步建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法。