TGF-β1 si-RNA对HSC Caspase-1及IL-1β的影响研究

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目的:研究TGF-β1对HSC细胞caspase-1及IL-1β表达的影响。  方法:构建有绿色荧光( GFP)标签、抗嘌呤霉素特性的Lentivirus-TGF-β1-siRNA及阴性对照病毒,用其转染HSC-T6,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。将细胞分为五组,分别为:对照组、对照+TGF-β1组、Lentivirus组、Lentivirus-TGF-β1-siRNA组、Lentivirus-TGF-β1-siRNA+TGF-β1组。qRT-PCR检测各组中caspase-1、Icaspase-1、pro-IL-1β、COL-I蛋白的表达。收集各组细胞上清后,ELISA检测IL-1β、IL-18的表达情况。不同浓度的IL-1β处理HSC-T624h后,CCK-8检测IL-1β促增殖的情况,qRT-PCR、Western-blot检测COL-ImRNA及蛋白的表达情况。  方法:构建有绿色荧光( GFP)标签、抗嘌呤霉素特性的Lentivirus-TGF-β1-siRNA及阴性对照病毒,用其转染HSC-T6,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。将细胞分为五组,分别为:对照组、对照+TGF-β1组、Lentivirus组、Lentivirus-TGF-β1-siRNA组、Lentivirus-TGF-β1-siRNA+TGF-β1组。qRT-PCR检测各组中caspase-1、L-1β、COL-I的mRNA水平的表达情况。Western-blot检测各组中caspase-1、pro-IL-1β、COL-I蛋白的表达。收集各组细胞上清后,ELISA检测IL-1β、IL-18的表达情况。不同浓度的IL-1β处理HSC-T624h后, CCK-8检测IL-1β促增殖的情况,qRT-PCR、Western-blot检测COL-I mRNA及蛋白的表达情况。  结果:干扰 TGF-β1后, caspase-1 mRNA及蛋白表达水平较Lentivirus组都明显升高,用TGF-β1处理24h后,caspase-1表达较未处理组降低(p<0.05)。ELISA结果显示Lentivirus-TGF-β1-siRNA组上清中的IL-1β较Lentivirus组升高。用TGF-β1处理后,对照+TGF-β1组、Lentivirus-TGF-β1-siRNA+TGF-β1组的IL-1β表达较未处理组降低(p<0.05),各处理组间IL-18的表达无明显差异。qRT-PCR检测各组中的IL-1β显示,各组的IL-1βmRNA无明显差异。Western-blot结果显示,各组之间pro-IL-1β表达也无明显差异。用不同浓度的IL-1β处理HSC-T6后,HSC-T6的增殖能力变强、COL-I mRNA及蛋白水平的表达增加(p<0.05),且均与浓度呈正相关。  结论:TGF-β1通过抑制caspase-1导致pro-IL-1β的裂解减少,从而抑制IL-1β的活化出胞。
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