背景:应用基于SPR(表面等离子体共振)技术的BIAcore生物分子相互作用仪,探讨β2整合素家族成员CD11b与乳糖衍生物Gu-4之间相互作用,分析Gu-4作用的确切靶点,并通过与其他乳糖衍生物相比较,筛选作用强度较高的乳糖衍生物,为后续的化合物设计、扩大药物筛选结构多样性提供了具体的靶标和结构指向。方法:原核表达CD11b胞外三段结构域蛋白(I domain、EGF domain和Lectin domain);通过对带有GST标签蛋白的纯化,得到三段原核蛋白;在CM5传感器芯片上设置4个通道,其中一个通道不固定任何样品作为空白参比通道,另外三个通道分别固定CD11b三段蛋白作为检测通道;以HBS溶液作为流动相,流速为10μL/min;活化芯片;封闭芯片;再以10μL/min的流速以梯度浓度进样Gu-4;获得结合动态图谱,将所得到的数据利用Bioevaluation动力学分析软件进行亲和力、动力学双模式拟合,得到结合常数(KD)和结合曲线;将结合常数(KD)较低,即和Gu-4结合活性较高的一段结构域蛋白作为靶蛋白;梯度浓度进样Gu-4与其他乳糖衍生物,与靶蛋白进行多循环动力学结合试验,利用Bioevaluation动力学分析软件分析其与靶蛋白结合常数和结合曲线,筛选结合强度较高的乳糖衍生物。结果:BIAcore T200测定Gu-4与CD11b的EGF domain蛋白的结合常数(KD)分别为0.237mM,与Ⅰ domain蛋白和Lectin domain蛋白几乎不结合,因此,选用EGF domain蛋白作为下一步其他乳糖衍生物筛选的靶蛋白。筛选得到结合强度(KD)较高的乳糖衍生物为ns-10、ns-12、L0、L3,结合强度(KD)分别为0.169mM、0.126mM、0.463mM、0.153mM。结论:Gu-4与CD11b作用的靶点很可能是EGF domain,同时筛选出ns-10、ns-12、L0、L3等乳糖衍生物,其与CD11b domain结合强度较之Gu-4更高,为后续的化合物设计、扩大药物筛选结构多样性提供了具体的靶标和结构指向。