24种普罗威登斯菌O抗原液相芯片体系的建立及其致病性的初步筛选

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普罗威登斯菌(providencia)是肠杆菌科中常见的革兰氏阴性菌,是人类肠道、尿路感染中常见的病原菌,是一种机会致病菌。主要通过院内长期导尿管滞留导致尿路感染或者食用不洁海鲜导致肠道感染,也可以引起呼吸道感染,败血症、继发性脑膜炎等病症。  前人研究已经定位了普罗威登斯菌的表面多糖抗原基因簇位点,O抗原决定簇位于cpxA基因和yibK基因之间。本研究破译并分析了该菌剩余O血清型的O抗原基因簇。本论文通过对另外49株普罗威登斯菌O抗原决定簇的分析发现:基因簇的GC%含量在20%-50%之间,变化幅度较大,且基因的转录方向也不完全一致。基因簇内除了一般 O抗原基因簇都含有的单糖合成酶基因、寡糖单位处理酶基因和糖基转移酶基因之外,有的O抗原基因簇内还包括K抗原合成途径所需要的wza、wzb和wzc基因,这对于后续研究普罗威登斯菌中O抗原基因簇与K抗原基因簇的相互位置有很大的参考意义。经生物信息学分析在O抗原基因簇中 wzx和 wzy基因的特异性较高,故被用来作为特异分子标识。本研究以wzy为靶基因设计了特异性分子探针和对应的引物,建立了针对24种普罗威登斯菌 O血清型的液相芯片检测体系。本研究首次大规模分析鉴定了普罗威登斯菌 O抗原基因簇,首次建立了针对普罗威登斯菌高通量分子水平的快速检测方法,为普罗威登斯菌的快速大量检测提供了科学依据与技术支持。  另外,本论文中还对普罗威登斯菌不同血清型肠道致病性进行了初步的筛选研究,筛选出了侵染 Hep-2细胞能力较强的菌株和侵染 Hep-2细胞能力较弱的菌株。这对于将来研究不同血清型普罗威登斯菌致病机制奠定了基础。
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