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目的:(1)通过检测小鼠口腔癌淋巴道转移模型从发生、发展直至淋巴结转移各阶段不同微环境(淋巴结、骨髓)中相关细胞因子的表达情况,探讨其在口腔癌淋巴结转移过程中的作用。(2)通过检测口腔癌细胞与微环境共培养前后相关细胞因子的表达情况,探讨肿瘤细胞对微环境的影响及在转移中的作用。方法:(1)应用4-NQO饮水法构建Balb/c小鼠口腔癌淋巴道转移模型,收集正常小鼠、喂药8周小鼠、中重度异常增生小鼠、口腔癌小鼠及颌下淋巴结转移癌小鼠的淋巴结及骨髓组织。(2)利用免疫组织化学法染色检测不同阶段小鼠颌下淋巴结、骨髓内转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子-β2(TGF-β2)、白细胞介素10(IL-10)、血管内皮生长因子(VEGF-A)的表达情况,以了解其在口腔癌淋巴结转移过程中的作用。(3)利用液相芯片检测不同阶段不同器官微环境中细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、白细胞介素12(IL-12p40)、白细胞介素6(IL-6)、趋化因子2(CXCL2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、VEGF-A的表达情况,以了解这些因子在口腔癌淋巴结转移过程中的作用。(4)利用Transwell小室建立不同阶段不同器官微环境和人舌鳞状细胞癌细胞系(SAS细胞)共培养模型,在共培养0h、24h、48h、72h时,收集微环境上清液,利用液相芯片法检测上述细胞因子的表达情况,以了解肿瘤细胞对微环境中细胞因子表达的影响。结果:(1)免疫组织化学法染色显示,细胞因子在骨髓涂片中的结果无法进行统计学处理,IL-10、VEGF-A在正常小鼠淋巴结内的表达水平高于喂药8周组小鼠(P<0.005),喂药8周组小鼠与中重度异常增生小鼠淋巴结内的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),在口腔癌及转移癌小鼠淋巴结内的表达水平逐渐上升(P<0.005)。TGF-β1在正常小鼠及喂药8周小鼠淋巴结内的表达差异无统计学意义(P>0.05),在中重度异常增生、口腔癌、转移癌各时期,TGF-β1的表达水平逐渐升高(P<0.005)。TGF-β2在正常小鼠、喂药8周时期小鼠、中重度异常增生时期小鼠的颌下淋巴结内表达水平逐渐增高(P<0.005),口腔癌时期淋巴结内TGF-β2的表达水平与中重度异常增生时期差异无统计学差异(P>0.05),转移灶中的TGF-β2表达水平较口腔癌组小鼠显著上升(P<0.005)。(2)正常小鼠组、喂药8周小鼠组、中重度异常增生小鼠组、口腔癌小鼠组及颌下淋巴结转移癌小鼠各组内IFN-γ、IL-10、IL-12p40、IL-6、CXCL2、TNF-α在淋巴结内的表达高于骨髓(P<0.05),VEGF-A在骨髓内的表达高于淋巴结(P<0.05),其中CXCL2在异常增生组及口腔癌组内淋巴结与骨髓的表达差异无统计学意义(P>0.05),而GM-CSF在各个阶段对应淋巴结和骨髓内的表达差异无统计学意义(P>0.05)。(3)在淋巴结内,IFN-γ在正常小鼠组、中重度异常增生小鼠组、口腔癌小鼠组及转移癌小鼠组的表达均低于在喂药8周组(P<0.05),中重度异常增生小鼠组高于正常小鼠组淋巴结(P<0.05);IL-10在正常小鼠组及转移癌组表达高于喂药8周组及中重度异常增生组(P<0.05);IL12p40在喂药8周小鼠组及转移癌小鼠的表达均高于正常小鼠组(P<0.05),在喂药8周组小鼠高于口腔癌小鼠(P<0.05),转移癌小鼠组高于中重度异常增生及口腔癌小鼠组(P<0.05);IL-6在正常小鼠组的表达高于喂药8周组及中重度异常增生组(P<0.05),喂药8周组低于中重度异常增生组、口腔癌、转移癌组(P<0.05),中重度异常增生组低于口腔癌组及转移癌(P<0.05);CXCL2在正常小鼠组及口腔癌组的表达高于喂药8周组(P<0.05);TNF-α在正常小鼠及喂药8周组小鼠的表达高于口腔癌组(P<0.05),在转移癌组淋巴结内的表达高于中重度异常增生组及口腔癌组淋巴结(P<0.05);VEGF-A在正常小鼠组的表达高于中重度异常增生组及口腔癌组(P<0.05),在中重度异常增生小鼠组的表达高于转移癌组(P<0.05),其余各组间的淋巴结表达差异无统计学意义(P>0.05)。在各阶段骨髓中,IFN-γ在正常小鼠、喂药8周组及转移癌组的表达高于中重度异常增生组及口腔癌组(P<0.05),在中重度异常增生组骨髓内表达高于口腔癌组(P<0.05);IL12p40在正常小鼠组表达均高于中重度异常增生组、口腔癌组及转移癌组(P<0.05),喂药8周组高于中重度异常增生组、口腔癌组(P<0.05),转移癌组高于口腔癌组(P<0.05),转移癌组及中重度异常增生组高于口腔癌组(P<0.05);IL-6在喂药8周小鼠组的表达低于中重度异常增生及口腔癌组(P<0.05);CXCL2在喂药8周组的表达高于中重度异常增生组和转移癌组(P<0.05),口腔癌组高于转移癌组(P<0.05),;TNF-α在正常小鼠组的表达高于中重度异常增生组及转移癌组(P<0.05),喂药8周组及转移癌组高于中重度异常增生组(P<0.05);VEGF-A在正常组小鼠的表达高于中重度异常增生组、口腔癌组及转移癌组(P<0.05),在喂药8周组高于中重度异常增生组、口腔癌组及转移癌组骨髓(P<0.05),其余各组骨髓间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。(4)SAS细胞对不同阶段骨髓内的GM-CSF、IFN-γ、IL-12p40、CXCL2的表达水平无明显影响,而GM-CSF、IFN-γ、IL-10、TNF-α、VEGF-A在正常小鼠、喂药8周小鼠和中重度异常增生小鼠淋巴结内的表达水平随共培养时间上升明显。结论:(1)IFN-γ、IL-10、IL-12p40、IL-6、CXCL2、TNF-α、VEGF-A以及TGF-β1、TGF-β2在小鼠口腔癌模型发生直至转移不同时期颌下淋巴结内的表达差异,提示这些细胞因子可能参与了口腔癌颌下淋巴结转移癌的形成过程。(2)IFN-γ、IL-10、IL-12p40、IL-6、TNF-α在口腔癌各阶段淋巴结内的表达高于骨髓,CXCL2在正常、口腔癌及转移癌小鼠淋巴结内的表达高于骨髓,这些表达的差异可能是口腔癌颌下淋巴结转移靶向性的重要原因。(3)肿瘤细胞与不同阶段骨髓和淋巴结微环境的共培养结果显示,相较于骨髓,其对淋巴结中细胞因子的表达水平影响较大,提示口腔癌淋巴结转移的靶向性可能是肿瘤细胞与细胞因子共同作用的结果。