【摘 要】
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目的:通过模拟体外肿瘤微环境,构建体外肠癌细胞与正常结肠上皮细胞和间充质干细胞的共培养模型,探讨在体外共培养环境下肠癌细胞对正常结肠上皮细胞和间充质干细胞分化发育的影响。方法:选取人结肠癌细胞株（SW480）、人正常结肠上皮细胞（NCM460）和人脐带间充质干细胞（h UC-MSCs）,使用Transwell小室建立共培养体外模型;实验共分成四组,每组的下室均接种NCM460细胞,上室接种细胞分组
【基金项目】
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《结直肠癌生物活性的评估及临床应用研究》，2018AB58035，广西科技厅重点研发计划; 《结直肠癌恶性腹水调控代谢重编程诱导间充质干细胞恶性转化的作用与机制研究》,2018GXNSFBA138033,广西自然科学基金青年科学基金; 结直肠癌转移浸润的生物诱导机制和临床诊疗模式转化的研究》,桂科AB16380202,广西重点研发计划
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目的:通过模拟体外肿瘤微环境,构建体外肠癌细胞与正常结肠上皮细胞和间充质干细胞的共培养模型,探讨在体外共培养环境下肠癌细胞对正常结肠上皮细胞和间充质干细胞分化发育的影响。方法:选取人结肠癌细胞株（SW480）、人正常结肠上皮细胞（NCM460）和人脐带间充质干细胞（h UC-MSCs）,使用Transwell小室建立共培养体外模型;实验共分成四组,每组的下室均接种NCM460细胞,上室接种细胞分组如下:A:空白对照组（不接种细胞）,B:只接种h UC-MSCs,C:只接种SW480,D:混合接种h UC-MSCs和SW480（1:1）;上下室细胞接种比例均为1:1。观察共培养后NCM460的形态学改变,并通过划痕实验和Transwell实验检测NCM460迁移能力变化;同时用Western blot检测NCM460共培养后的上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal Transition,EMT）标志物改变。随后再选取SW480和h UC-MSCs细胞建立体外共培养模型,初步探讨SW480对h UC-MSCs的可能诱导作用;在7天共培养模型中共分成三组,每组下室接种h UC-MSCs,上室接种SW480细胞,各组按比例（SW480:h UC-MSCs=0:1,1:1,2:1）铺板,并观察其形态学改变和TP53、α-SMA的蛋白表达情况。在14天共培养模型中,共分为四组,各组按比例（SW480:h UC-MSCs=0:1,1:1,2:1,10:1）铺板,检测h UC-MSCs的TP53、α-SMA的蛋白表达情况。计量资料采用:均数±标准差（?X±SD）表示,两组间比较采用非配对双侧t检验,多组间比较采用单因素方差分析,L-SD用于两两样本间的多重比较,Ph UC-MSCs组>SW480组;2.共培养后NCM460的EMT标志物Vimentin蛋白上调,E-Cadherin蛋白下调;3.h UC-MSCs组和h UC-MSCs+SW480组细胞共培养上清液中包含大量IL-6/IL-8因子;4.共培养7天后h UC-MSCs的α-SMA蛋白表达水平上并未出现显著改变;共培养14天后,在10:1的比例共培养组中h UC-MSCs的α-SMA蛋白的表达水平明显上调;5.共培养7天后,各组h UC-MSCs的TP53蛋白表达水平,并未出现显著改变（P>0.05）;共培养14天后,共培养组的h UC-MSCs的TP53蛋白的表达水平明显下调（P<0.05）。结论:1.共培养后,h UC-MSCs或SW480可以促使正常结肠上皮细胞NCM460迁移愈合能力,并使NCM460高表达上皮间质转化标志物Vimentin蛋白,E-Cadherin蛋白下调;2.在共培养的条件下,SW480可以诱导h UC-MSCs的TP53蛋白的表达水平明显下调,并且可能诱导h UC-MSCs的α-SMA蛋白的表达水平上调;提示肿瘤的局部环境可能会对正常的细胞产生相应的诱导性作用。
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