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目的:研究中成药心宝丸对慢性心力衰竭(CHF)的有效成分、药物作用靶点、机制和对大鼠H9c2心肌细胞损伤的药效。方法:网络药理研究,建立心宝丸与CHF的“成分-靶点-通路-疾病”网络药理模型。通过 Drugbank Database、Therapeutic Target Database(TTD)和 Research Collaboratory for Structural Bioinformatics(RCSB)数据库筛选并建立 CHF 的靶蛋白数据库。利用AutoDock4.0软件对CHF的靶蛋白和Cardiovascular Disease Herbal Database(CVDHD)库筛选的心宝丸药理成分进行对接,识别心宝丸主要活性成分群和靶蛋白群,通过DAVID数据库和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes数据库对筛选的靶蛋白进行注释和通路分析,心宝丸治疗慢性心力衰竭的疾病靶点富集映射的通路通路被认为可能是心宝丸治疗慢性心力衰竭的通路。心宝丸药效研究,建立H2O2诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的细胞模型。用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)法和 LDH检测试剂盒检测细胞活性和损伤,细胞凋亡检测试剂盒、ATP检测试剂盒、线粒体复合酶I检测试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒、ROS检测试剂盒和线粒体红色荧光探针评估细胞线粒体功能、活性损伤程度和能量代谢水平,并通过倒置荧光显微镜观察细胞形态学损伤。结果:(1)心宝丸9味中药中具有996个与治疗心血管疾病相关的化合物,包括洋金花92个、人参451个、肉桂119个、附子25个、鹿茸21个、冰片0个、麝香41个、三七183个和蟾酥64个。(2)洋金花、人参、麝香、蟾酥4味中药可能是心宝丸发挥抗心衰作用的主要药物,其主要药物成分包括洋金花的白曼陀罗素F、withametelin B、withanolide B、isowithametelin、Withametelin、Withatatulin;人参的人参皂苷3β-TF-16β-H-20-烯和皂苷乙胆碱;蟾酥的谷甾醇和甲基胆固醇;麝香的五亚甲基吡啶。来自这4味中药的药物靶点包括 MMP-9、NR3C1、CYP11B2、PDE3B、DRD2、HTR2B、MMP-3、RGS2、PPARA、MAPK10和ADORA1等1 1个,有效成分的结合靶点多与细胞线粒体功能、能量代谢、心肌细胞炎症、氧化应激以及纤维化有关,提示心宝丸的药效成分可能主要在这些方面发挥作用。(3)在通路机制分析中,cAMP信号通路、cGMP-PKG信号通路、神经活性配体-受体相互作用、TNF信号通路、脂肪细胞中脂解的调控、肾素分泌和脂肪细胞因子信号通路为心宝丸发挥作用的可能机制。这些通路多与细胞线粒体功能、细胞损伤、凋亡、纤维化相关的信号通路,与靶点的作用相一致。心宝丸可能通过作用与细胞线粒体功能、细胞损伤、凋亡、纤维化相关的靶点,引起其通路信号的激活或抑制,达到治疗慢性心力衰竭的作用。(4)心宝丸除了对抗心衰作用外,对肥厚型心肌病、高血压、Ⅱ型糖尿病、扩张型心肌病、冠状动脉疾病、深静脉血栓形成等疾病均有潜在治疗作用。(5)心宝丸对细胞无毒性作用,在较高剂量时(1000μg/ml),还具有细胞营养作用,可促进细胞的增殖(P<0.05)。(6)心宝丸可抑制H2O2对H9c2心肌细胞的损伤,250μg/ml和500μg/ml两个剂量的心宝丸可有效提高细胞活性(P<0.05),抑制H2O2诱导细胞损伤因子LDH的分泌(P<0.05);250μg/ml和500μg/ml两个剂量可抑制H2O2诱导H9c2心肌细胞的坏死率(P<0.05);而125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml 3个剂量均可有效降低H2O2诱导的晚期凋亡率和降低H202诱导的氧化应激水平(P<0.05)。同时,600μmol/L H2O2对早期凋亡率无影响(P>0.05),有趣的是,由饥饿过夜引起的低水平(<5%)早期凋亡率,也可被心宝丸125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml 3个剂量有效抑制(P<0.05)。(7)心宝丸具有保护线粒体功能和稳态的药效,心宝丸可以减轻H202引起的线粒体损伤,保护线粒体的生物活性。心宝丸125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml三个剂量可提升H2O2诱导H9c2心肌细胞的ATP水平的下降,仅500μg/ml高剂量具有显著性(P<0.05);三个剂量均可有效降低H2O2诱导线粒体膜电位降低的细胞比例和抑制线粒体复合酶Ⅰ活力的损伤(P<0.05);结论:(1)心宝丸中洋金花、人参、麝香、蟾酥4味中药可能是心宝丸治疗慢性心力衰竭的主要药物,与细胞线粒体功能、能量代谢、心肌细胞炎症、氧化应激以及纤维化有关,心宝丸具有治疗肥厚型心肌病、高血压、Ⅱ型糖尿病、扩张型心肌病、冠状动脉疾病等疾病的潜在药效。(2)心宝丸药效研究证明心宝丸可不同程度地抑制H202诱导大鼠H9c2心肌细胞的损伤和氧化应激水平、线粒体功能障碍、生物活性损伤与能量代谢。(3)心宝丸作为新开发的中成药,对慢性心力衰竭具有一定的作用并对细胞损伤模型产生药效,可以作为潜在的抗慢性心力衰竭药物。