论文部分内容阅读
1.Stecrisp的结构和功能研究CRISP(富含半胱氨酸分泌蛋白)家族具有与精卵融合，先天宿主免疫和离子通道抑制等多种不同的功能。我们从皖南竹叶青(Trimeresurusstejnegeri)蛇毒中分离纯化了一种新的蛋白，并确认了它是CRISP家族中的一个成员。为更好的了解CRISP蛋白的功能性质，首次解析了stecrisp1.6A分辨率的晶体结构。Stecrisp的结构由三个部分组成：N-端的PR-1(pathogenesis-relatedproteinsofgroup1)结构域，中间的铰链区和C-端的富含半胱氨酸结构域(CRD)。PR-1结构域中的溶剂暴露残基(His60，Glu75，Glu96，His115)与同源结构中的构象非常相似，暗示他们可能具有某些共同的分子机制。PR-1结构域中围绕可能的活性中心的三段高度可变的柔性loop与其同源结构明显不同，表明stecrisp在识别和催化过程中存在大的种属和底物特异的分化。而酶活性实验的负结果进一步支持这一观点。铰链区通过C-端区域中特征性的10个半胱氨酸残基中的四个形成交叉的二硫键，对于稳定N-端PR-1结构域有重要作用。空间上远离PR-1结构域的CRD结构域具有一个类似与两种K+-通道抑制剂(Bgk，Shk)的折叠类型。几个可能的功能位点位于CRD结构域的一段溶剂暴露的loop上。Stecrisp的结构解析为进一步研究CRISP家族不同成员的功能机理提供了一个结构原型。
2.转录延伸因子复合物DSIF的结构研究DSIF是真核细胞中调控许多基因表达的一种普遍的转录延伸因子。它由spt4和spt5两个亚基组成。在体外，DSIF作为一个负延伸因子增加RNAPⅡ的暂停；在体内它则可以促进延伸。DSIF与RNAPⅡ紧密结合，而且与其他许多因子存在遗传的和直接的相互作用，这些相互作用包括TFⅡS，TFⅡF，CSB，和染色质有关的因子spt6，FACT,Chd1，PAF，以及与mRNA成熟和监督有关的因子。我们首次解析了酵母中spt4和spt5-NGN结构域的复合物结构。复合物中亚基之间通过一种延长的β-片层的方式以疏水界面结合在一起。与这一相互作用相关的残基在古细菌的同源蛋白中也是严格保守的，这可能暗示在进化过程中的这一复合物是一直存在的。在将大部分与复合物内部相互作用有关的残基排除掉以后，DSIF复合物中与转录调控功能直接相关的其他残基被更加清晰的描绘出来。有关它们可能作用的进一步探索正在进行中。spt4-spt5-NGN复合物结构的解析为深入了解spt4-spt5的调节转录机理奠定了重要的结构基础。