泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠血清及肠粘膜EGF、NO、NOS的影响

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:g19801218
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目的:溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)是一种病因不明的发生在结肠的慢性非特异性炎症性疾病,多发生于远端结肠,也可遍及全结肠,以糜烂、溃疡为主要病理变化,以腹痛、腹泻、粘液脓血便和里急后重为主要临床表现。近年来,随着人们生活习惯和环境因素的改变,UC的发病率逐年升高,严重影响患者的学习、工作及生活。我们根据中医“浊毒”理论及溃疡性结肠炎病机,提出“泄浊升清,解毒祛瘀”之治疗大法,选出经验方泄浊解毒方,通过动物实验,观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠血清及肠粘膜EGF、NO、NOS的影响,并与柳氮磺胺吡啶进行疗效比较,探讨该方治疗UC可能的作用机制,以期为UC的治疗提供一定的理论及实践依据。方法:本研究采用三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene-sulfonicacid,TNBS)/乙醇联合造模法诱导大鼠溃疡性结肠炎动物模型,取健康清洁级Wistar大鼠45只,体重220-250g,雄性,随机抽取8只作为空白组(BG),其余大鼠由肛门推入含TNBS100mg/kg的30%乙醇溶液,复制溃疡性结肠炎的动物模型。3天后,随机抽取5只造模大鼠处死,取其结肠标本,病理检查确认其有充血、水肿及典型溃疡形成等一系列病理变化即为造模成功。将剩余造模大鼠随机分为模型组(MG)、柳氮磺胺吡啶组(SG)、泄浊解毒方小剂量组(LG)、泄浊解毒方大剂量组(HG)4组,每组8只。BG、MG组用生理盐水灌胃,SG、LG、HG组分别给予柳氮磺胺吡啶液0.3g/kg、泄浊解毒方水煎剂10.0g/kg、泄浊解毒方水煎剂20.0g/kg灌胃,每日1次,连续治疗14天,观察其疗效。实验从3个方面进行研究探讨:实验一观察泄浊解毒方对UC大鼠一般状况及结肠组织病理学的影响。实验二分别采用放射性免疫技术及免疫组化技术检测泄浊解毒方对UC大鼠血清EGF含量及结肠组织EGF的表达。实验三采用硝酸还原酶法检测血清NO及结肠组织中NO含量;化学法检测血清中NOS活性及NOS活性。采用SPSS13.0进行统计学分析,以P<0.05作为有统计学意义的判定标准。结果:1实验一:一般状况:MG组及各治疗组大鼠与BG组相比均有不同改变,HG组大鼠的精神状态、毛发光泽度、反应情况、进食、体质量、大便性状等情况均好于其它组,其中MG组情况最差。大鼠的疾病活动指数(DAI)评分:BG组大鼠DAI评分较低,MG组大鼠DAI评分显著增高,两组相比有显著差异性(P<0.05)。HG组、LG组、SG组与MG组相比大鼠DAI评分均明显降低,均有非常显著性差异(P<0.05)。HG组与SG组相比,大鼠DAI评分降低,有非常显著性差异(P<0.05);SG组与LG组相比,大鼠DAI评分无显著性差异(P>0.05)。结肠粘膜损伤指数(CMDI)评分:BG组大鼠CMDI评分较低,MG组大鼠CMDI评分显著增高,两组相比有显著差异性(P<0.05)。与MG组相比,SG组、LG组、HG组大鼠CMDI评分明显降低,均有显著性差异(P<0.05)。与SG组相比,HG组大鼠CMDI评分明显降低,有显著性差异(P<0.05);LG组与SG组大鼠CMDI评分相比,无显著性差异(P>0.05)。光镜下结肠病理组织观察:BG组大鼠结肠组织全层结构清晰,无溃疡、糜烂及充血,黏膜上皮细胞排列整齐,肠腺规则,杯状细胞丰富,固有层可见毛细血管纹理;SG组与LG组结肠溃疡较表浅,溃疡旁上皮修复明显,腺体增生活跃,隐窝、肠腺及间质可见少量炎性细胞浸润;HG组结肠粘膜上皮及腺管排列整齐,腺体增生活跃,杯状细胞丰富,间质充血水肿不明显,隐窝、肠腺及间质可见炎性细胞浸润,其基本形态与BG组相似。2实验二:放射性免疫法测定大鼠血清EGF含量:MG组与BG组相比,两组血清EGF含量无显著性差异(P>0.05);SG组与MG组相比,血清EGF含量升高,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。SG组与LG组相比,差异无统计学意义(P>0.05);HG组与SG组相比,血清EGF含量升高,差异有显著性差异(P<0.05);SG组与LG组相比,血清EGF含量升高,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。免疫组织化学法测定大鼠结肠组织EGF的表达:MG组与BG组相比,两组结肠EGF表达无显著性差异(P>0.05);SG组与MG组相比,血清EGF含量升高,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。柳氮磺胺吡啶组与泄浊解毒方小剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05);泄浊解毒方大剂量组与柳氮磺胺吡啶组相比,血清EGF含量升高,差异有显著性差异(P<0.05)。3实验三:用硝酸还原酶法及化学法检测UC大鼠血清NO含量及NOS活性:MG组与BG组相比,其血清NO含量及NOS活性升高,(P<0.05),差异有统计学意义;SG组与MG组相比,血清NO含量及NOS活性降低,差异有显著性差异(P<0.05)。SG组与LG组相比,差异无统计学意义(P>0.05);HG组与SG组相比,血清NO含量及NOS活性降低,差异有统计学意义;(P<0.05);HG组与LG组相比,血清NO含量及NOS活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。用硝酸还原酶法及化学法检测UC大鼠结肠组织NO含量及NOS活性:BG组大鼠结肠组织NO含量及NOS活性处于较低水平,MG组大鼠结肠组织NO含量及NOS活性显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);SG组、LG组及HG组大鼠结肠组织NO含量及NOS活性较MG组相比,均降低,其中,HG组与MG组相比,大鼠结肠组织NO含量及NOS活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);LG组、SG组大鼠结肠组织NO含量及NOS活性与MG组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:泄浊解毒方能改善溃疡性结肠炎大鼠的一般状况,降低病理学损伤评分,增加血清中EGF的含量,促进结肠组织中EGF的表达,同时降低大鼠血清及结肠组织中NO含量及NOS活性,通过EGF对结肠粘膜屏障的保护作用而促进粘膜损伤的修复,加速UC结肠粘膜病变的愈合,调整结肠粘膜的免疫功能。这可能是泄浊解毒方治疗UC的作用机制之一。为我们以后研究UC的临床治疗,找到了新的契机。
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